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交联剂对脱细胞膀胱基质生物力学性能的影响
目的 研究不同交联剂对猪脱细胞膀胱基质的组织结构影响,并比较其生物力学性能,为盆底修复替代材料的选择提供依据.方法 采用表面活性剂+酶消化法去除新鲜猪膀胱的细胞成分,将脱细胞膀胱基质随机分为3组,A组经0.25％戊二醛交联,B组经0.625％京尼平交联,C组未交联.对各组材料进行HE染色,观察纤维的变化情况.使用生物力学性能测试系统检测抗拉强度、断裂伸长率、弹性模量,并进行统计学分析.结果 京尼平交联脱细胞膀胱基质后呈深蓝色,保持了天然组织构架的完整,纤维更加致密.戊二醛交联脱细胞膀胱基质后呈浅黄色,纤维排列紊乱且有断裂.新鲜猪膀胱经上述三种方法处理后,其弹性模量增大、断裂伸长率减小,而其中京尼平交联处理的脱细胞膀胱基质力学性能与新鲜膀胱组织更为相近.结论 京尼平交联的脱细胞膀胱基质组织结构的形态佳,同时较大限度地保留膀胱组织的力学性能,可能是较理想的盆底重建材料.
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脂肪干细胞与不同脱细胞基质的组织相容性研究
目的 研究SD大鼠脂肪干细胞与不同脱细胞膀胱基质(BAMG)的体外生物相容性,为进一步把细胞支架复合物回植动物体内提供有利的实验基础.方法 取SD大鼠双侧腹股沟处脂肪组织经过相应处理后得到原代脂肪组织,进行成骨、成脂诱导染色及流式细胞术检测CD29、CD34、CD44及CD45,对脂肪干细胞进行鉴定,同时制备鼠及新西兰兔BAMG,采用2次沉淀法将脂肪干细胞静态接种于不同BAMG表面,观察细胞在材料表面的生长状况,并绘制细胞生长曲线.结果 细胞材料体外复合培养5 d后行HE染色后观察可见SD大鼠脂肪干细胞在SD大鼠BAMG表面生长状态较其在新西兰兔BAMG表面生长状态好,且细胞形态舒展成长梭形,细胞生长曲线与SD大鼠原代脂肪干细胞基本一致.结论 SD大鼠脂肪干细胞接种于SD大鼠BAMG复合物表面生长状况相比于其接种于新西兰兔BAMG复合物表面更加良好,具有更好的生物相容性.为进一步把细胞支架复合物回植动物体内提供有利的实验基础.
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脱细胞膀胱基质复合大鼠骨髓间充质干细胞体外构建组织工程化吊带治疗压力性尿失禁的初步研究
目的 探讨脱细胞膀胱基质(urinary bladder matrix,UBM)复合大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)构建组织工程化吊带治疗压力性尿失禁的可行性.方法 采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离、培养和扩增BMSCs,流式细胞术检测BMSCs免疫表型,将第3代BMSCs与UBM复合培养,7d后通过光镜和电镜观察细胞在材料上的生长情况,进一步应用万能力学测试仪检测所构建吊带的大负荷、杨氏模量、伸展性等机械特性,另以UBM负载大鼠膀胱平滑肌细胞株(smooth muscle cells,SMCs)构建SMCs吊带、单纯UBM及聚丙烯材料行效果比较.结果 分离培养的BMSCs呈长梭形,折光性好,增殖旺盛,具有成体干细胞特性,细胞表面标志物CD29阳性,CD45和CD31阴性.UBM去细胞彻底,复合BMSCs或SMCs均可获得生长良好的细胞.机械性状检测表明,单纯UBM和复合BMSCs的UBM吊带与SMCs吊带及聚丙烯材料相比,大负荷下降[(0.025 ±0.003)、(0.018±0.004) kN vs(0.030±0.003)、(0.143 ±0.034) kN,P＜0.01]；杨氏模量下降[(170.820±61.735)、(103.624±52.779) MPa vs(490.730±80.969)、(900.100±192.402) MPa,P＜0.01]；伸展性提高[(16.418±1.014)、(22.684±6.848) mm vs(9.498±1.384)、(2.975 ±0.401) mm,P＜0.01].结论 成功分离、培养了大鼠BMSCs,并鉴定了其干性.构建的干细胞吊带与SMCs吊带及聚丙烯材料相比,其伸展性良好.
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负载抗sca-1抗体和碱性成纤维细胞生长因子的脱细胞膀胱基质的生物性能研究
目的 观察负载抗sca-1抗体(anti-sca-1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)-脱细胞膀胱基质(urinary bladder matrix,UBM)生物支架的生物学性能,探讨其作为新型盆底修复材料的可能性.方法 通过双特异性化学交联试剂4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl] cyclohexane-l-carboxylate,sulfosmcc)将anti-sca-1和bFGF特异性结合到UBM上,得到anti-sca-1/bFGF-UBM生物支架.通过扫描电子显微镜观察生物支架表面结构,CCK-8(cell counting kit-8)间接检测体外富集sca-1阳性细胞情况,免疫荧光观察支架诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,mMSCs)分化成熟情况.结果 扫描电子显微镜显示anti-sca-1和bFGF能特异性的结合到UBM上.anti-sca-1和bFGF组荧光强度明显高于对照组(P＜0.05).anti-sca-1/bFGF-UBM生物支架富集的sca-1阳性细胞明显较对照组多(P＜0.05).免疫荧光观察结果提示anti-sca-1/bFGF-UBM生物支架可以促进mMSCs向平滑肌细胞分化.结论 anti-sca-1/bFGF-UBM生物支架显示出了良好的生物性能,既能富集sca-1阳性细胞,又能进一步促进细胞分化成熟.
关键词： 抗sca-1抗体 碱性成纤维细胞生长因子 脱细胞膀胱基质 生物支架 生物性能 -
脱细胞膀胱基质补片的生物相容性研究
目的：评价脱细胞膀胱基质作为盆底修复替代材料的生物相容性。方法通过细胞毒性试验、溶血试验、阴道埋植试验等体内外生物学实验相结合的方法评价该材料的生物相容性。结果在细胞毒性试验中，材料毒性级别0～1级。材料浸提液的溶血率为1．5％。大体和组织学观察示材料未引起宿主免疫排斥反应，植入后引起轻度的异物反应，移植12周后基本降解。结论该材料具有良好的生物相容性，但需调整其降解率，以适应盆底修复手术要求。
