首页 > 文献资料
-
CRISPR-Cas9系统在真核细胞领域内的研究进展
CRISPR-Cas免疫系统在天然状态下保护细菌和古生菌免受外来质粒或噬菌体的入侵.研究者们根据Ⅱ型CRISPR-Cas系统开发了全新的基因编辑工具——CRISPR-Cas9,它利用与靶序列互补的向导RNA引导Cas9酶定点切割DNA,该技术具有设计简单、操作方便、特异性强、效率高等优势,成为新一代基因组编辑技术.本文综述了CRISPR-Cas系统的技术发展史、新分类和作用原理,重点介绍了近几年来CRISPR-Cas9系统应用于真核细胞领域的研究进展.
关键词： CRISPR-Cas9系统 真核细胞 基因编辑 基因调节 -
Trim72基因在肝癌转移中的功能研究
目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随后利用针对Trim72基因的单导向RNA(sgRNA)进行特异性基因敲除获得Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,再通过体外Transwell实验和体内皮下瘤肺转移检测评估该细胞系的迁移和侵袭能力.结果 利用CRISPR-Cas9系统成功获得了Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系.Transwell实验结果表明,敲除Trim72基因后,Hepa1-6(Cas9)细胞系的体外迁移和侵袭能力增强;体内皮下瘤肺转移病理检查结果显示,Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系(实验组)所成皮下瘤的体内转移能力明显强于未转入相应sgRNA的Hepa1-6(Cas9)细胞系(对照组).结论 通过CRISPR-Cas9系统成功获得了敲除Trim72基因的Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,该细胞系表现出较Hepa1-6(Cas9)细胞系更强的侵袭和转移能力,说明Trim72基因可能在肝癌的侵袭和转移中起重要作用,有望成为肝癌基因治疗的潜在靶点.
关键词： CRISPR-Cas9系统 Trim72 基因敲除 肝癌 -
CRISPR-Cas9系统在细菌学领域内的应用研究进展
CRISPR-Cas免疫系统在天然状态下保护细菌和古生菌免受外来质粒或噬菌体的入侵.CRISPR-Cas9技术属于Ⅱ型CRISPR-Cas系统,它利用与靶序列互补的向导RNA引导Cas9酶定点切割DNA,该技术具有设计简单、操作方便、特异性强、效率高等优势,成为新一代基因组编辑技术.本文综述了CRISPR-Cas系统的新分类和作用原理,重点介绍了近几年来CRISPR-Cas9系统应用于细菌学领域所取得的研究进展.
关键词： CRISPR-Cas9系统 细菌 基因编辑 基因调节 -
斑马鱼Dio3b基因敲除模型的构建
目的 通过观察3型甲状腺激素脱碘酶(Dio3b)基因敲除的斑马鱼在心率、自主运动及胚胎发育等方面的变化,探讨斑马鱼Dio3b基因的生物学功能.方法 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除斑马鱼Dio3b基因,利用PCR和测序技术鉴定突变位点,确定Dio3b-/-斑马鱼的建立;利用显微镜拍摄并记录Dio3b--和野生型胚胎在受精后48 h的心率变化;利用斑马鱼行为追踪系统观察Dio3b-/-和Dio3b+/+胚胎在胚胎出生后5~7 d的运动变化.结果 成功构建了携带8碱基缺失移码突变的斑马鱼Dio3b敲除的斑马鱼模型;在胚胎出生后48 h,Dio3b-/-胚胎的心率相较于野生型明显增加(P＜0.001);在胚胎出生后5~7 d,Dio3b-/-幼鱼的自主运动明显加快(P＜0.05).结论 敲除Dio3b基因的斑马鱼存在心率加快、自主运动增加,这类表型与临床甲状腺功能亢进患者相似,说明该模型可以作为局部组织中甲状腺功能亢进的疾病模型,用于研究胚胎期过量的甲状腺激素对发育的影响.
关键词： 斑马鱼 CRISPR-Cas9系统 3型甲状腺激素脱碘酶 甲状腺激素 心率
