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睾酮固相放射免疫分析方法的建立
目的 建立一种睾酮固相放射免疫分析方法,实现睾酮液相放射免疫分析药盒的固相包被管分离.方法 利用本公司专利技术纯化出亲和纯驴抗兔抗体,将其包被于聚苯乙烯试管上,兔抗-睾酮抗体能与驴抗兔抗体结合而被间接包被上,从而制备出睾酮抗体包被管,再采用标准抗原与标记抗原竞争包被在聚苯乙烯试管上定量抗体的技术思路,建立睾酮固相放射免疫分析方法.结果 睾酮抗体包被管中亲和纯驴抗兔抗体包被浓度为20μg/mL,兔抗-睾酮抗体包被滴度为1∶5万;本方法的反应条件为37℃温育1h,测量范围为0.1～20 ng/mL,灵敏度为0.02 ng/mL,批内变异为4.37％～6.84％,批间变异为6.31％ ～9.03％,回收率为93.6％～104.1％,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.999;与合格睾酮液相放射免疫分析药盒的相关性方程为Y=1.05X+0.01,相关系数r=0.982;睾酮抗体包被管、125I-睾酮标记物以及睾酮标准品在37℃存放1周稳定性良好.结论 本方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求.
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Leptin固相放射免疫分析法的建立
目的:研究瘦素(Leptin)固相放射免疫分析法的建立.方法:将提取的兔抗人Leptin特异性抗体IgG,包被在活化的塑料试管内壁,建立了简便、快速、高灵敏、特异的固相竞争RIA,测定人血清Leptin.结果:标准曲线范围为(0.5～24)ng/ml;测定69例健康人血清正常值为(3.68 ±1.46)ng/ml;小检出值为0.38ng/ml,批内CV%为5.6%,批间CV%为8.8%;回收率为92%.本文所建方法与液相RIA标准曲线具有良好的平行性;使用两种方法平行测定88份血清Leptin浓度(1.00～7.68)ng/ml,经统计学处理两者之间具有良好的直线相关(r=0.987,P<0.001,Y=0.977X).结论:所建立的Leptin固相放射免疫分析法为科研及临床病人血清Lepfin浓度的测定提供了一种新的检测方法.
