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酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用
酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白-蛋白相互作用的新技术.应用该技术,以丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)为"诱饵",筛检了人肝癌细胞HepG2来源的cDNA文库,获得了7个NS5A结合蛋白的基因克隆.报道了其中两个粜钥寺?#2、#16)的结果,并对"人核小体组装蛋白相关蛋白"(Human nucleosome assembly protein-related protein,hNRP)和"载脂蛋白A-I"(Apolipoprotein A-I)与NS5A结合的生物学意义进行了讨论.
关键词： 酵母双杂合系统 丙型肝炎病毒 人核小体组装蛋白相关蛋白 载脂蛋白A-I -
利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质
目的利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Human estrogen receptor related-receptorα1, hERRα1)相互作用的蛋白质,特别是新的核受体辅助活化因子,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参与ERR1调控基因的表达.方法以质粒pGBT9-hERRα1/LBD为"诱饵",筛选人乳腺组织cDNA文库.结果筛得有阳性相互作用的克隆共17个.除3种为已知核受体辅助调节因子外,其他为功能已经明确的蛋白,其中有3种与hERRα1有明显相互作用.结论核受体辅助活化因子SRC-1,RIP140,TRIP及数种已知蛋白能与孤儿核受体hERRα1在乳腺组织中相互作用.
关键词： 人雌激素受体相关受体α1 核受体辅助活化因子 酵母双杂合系统 乳腺癌 -
hERR1/HBD酵母表达质粒的构建及初步鉴定
目的构建酵母双杂合系统诱饵蛋白表达质粒pGBT9-hERR1/HBD.方法 PCR扩增hERR1/HBD(激素激活域)cDNA,与酵母Gal4/DBD(DNA结合域)表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒,酶切、测序鉴定后,用于酵母双杂合分析,检查其自主转录激活作用及与已知hERR1辅活化子PNRC的相互作用.结果该质粒有正确的阅读框,其表达蛋白不具有自主转录激活作用,与已知核受体辅活化子PNRC有明显的相互作用.结论成功构建了表达质粒pGBT9-hERR1/HBD,并证实该质粒可作为酵母双杂合系统的诱饵蛋白质粒,用于乳腺组织中与hERR1有相互作用的蛋白质基因的筛选.
关键词： 乳腺癌 雌激素受体相关受体-1 酵母双杂合系统 -
人TLR4胞外区cDNA克隆及其酵母表达载体的构建
研究表明:TLR4是哺乳动物LPS作用的受体,介导LPS的生理和病理效应[1～3].有关研究取得明显的进展,但对于其识别的配体目前还未阐明.新近发现并广为应用的酵母双杂交技术给上述研究提供了新的机遇.因此,本研究克隆TLR4胞外区cDNA,并构建酵母双杂交系统的靶基因,为进一步利用该系统研究与TLR4相互作用的蛋白质奠定基础.
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酵母双杂合系统AD端阴离子交换蛋白C-末端表达质粒的构建
利用PCR方法,从阴离子交换蛋白1(AE1)全长cDNA中扩增出约350bp c 末端 cDNA片段.测序后将其克隆至pGADT7载体上.用醋酸锂法将构建好的pGADT7-AE1-c-末端转染酵母菌AH109,观察其在选择性培养基上的表达情况.结果表明,获得了350bp AE1c-末端 cDNA,pGADT7-AE1-c-末端对酵母无毒性,不能激活检测基因,可作为酵母双杂合系统中的靶基因.
