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鸭肠炎病毒感染鸭脾脏的转录组分析
为探明鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)感染鸭脾脏的转录组情况,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50 d鸭,于接种后66h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,采用Illumina HiSeq 2000TM对试验组和对照组样品进行测序,筛选DEV感染鸭脾脏组织的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析.结果显示,差异表达基因共511个,其中表达上调312个,表达下调199个.GO功能分类结果显示,差异表达基因主要涉及氧运输、整合素活化、补体激活等生物学过程,胞外区、血红蛋白复合物、细胞外间隙等细胞组分,氧转运活动、氧结合、核糖体的结构成分等分子功能.KEGG分析表明这些差异表达基因参与ECM受体相互作用、核糖体、CAMs、JAK-STAT信号通路、细胞因子和细胞因子受体相互作用、PPAR信号通路、神经活性配体/受体相互作用信号通路.本研究为深入探究DEV与鸭脾脏组织互作、宿主抗病机制及相关功能基因的筛选奠定了基础.
关键词： 鸭肠炎病毒(DEV) 鸭脾脏 转录组测序 -
鸭肠炎病毒感染诱导鸭胚成纤维细胞γ干扰素上调表达及初步机制的研究
目的 探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制.方法 分别提取感染DEV后24h、36h、48 h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因(ISGs)mRNA水平的变化.结果 感染DEV的细胞相对于未感染的细胞,删的mRNA在24 h、36 h、48 h、60 h均显著上调,且相关ISGs包括抗黏液病毒基因(Mx)、DEAD框蛋白50(DDX50,是一种ATP依赖的RNA解旋酶)、2'-5'寡腺苷酸合成酶L(OASL)等基因的mRNA表达水平也均显著上调.结论 DEV感染DEF能够诱导IFNγ产生及相关ISGs表达的上调.
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表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因重组鸭肠炎病毒的构建
目的 构建表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因的重组鸭肠炎病毒(DEV).方法 利用同源重组技术,在DEV Clone-03基因组中胸苷激酶(TK)基因内部插入新城疫病毒HN基因.以本实验室已构建的rDEV TK-EGFP株为亲本病毒,将病毒基因组与转移载体共转染及蚀斑纯化,获得表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒.结果 重组病毒经基因水平和蛋白水平的鉴定,证明新城疫病毒HN基因正确插入DEV基因组内部且有效表达;复制动力学和遗传稳定性检测,证明重组病毒rDEV TK-HN滴度略有下降,但复制趋势与亲本病毒一致;在鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡胚连续传代20代,表明HN基因随病毒传代而稳定遗传、表达.结论 利用同源重组技术,对鸭肠炎病毒基因组进行修饰,构建了TK基因缺失表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒,该病毒能够携带HN基因稳定遗传和表达.
