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不同组织嗜性传染性支气管炎病毒核衣壳基因的遗传变异性分析
根据GenBank发表的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette毒株核衣壳(nucleocapsid,N)基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法分别扩增了疫苗毒株IBV-H52、嗜腺胃ZJ971株、嗜肾IBV-X和N株的N基因ORF,并克隆到质粒载体pBluescript SK(+),测序后用PCgene和DNA Star软件分析.结果显示:4株IBV的N基因均含有一个长1 230bp的ORF,编码一由409个氨基酸残基组成的N蛋白.嗜肾IBV-X和N毒株的N基因存在Hind Ⅲ酶切位点.与来自GenBank的另外8株IBV比较,ZJ971株与它们的N蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在88.2%～98.6%和91.2%～97.8%;N株则分别为86.6%～87.4%和90.5%～91.5%;X株分别为86.3%～87.4%和90.0%～91.5%;H52分别为90.4%～98.3%和92.0%～98.0%.ZJ971株、N和X株的N基因的突变特点是散在的点突变.嗜腺胃ZJ971株核衣壳蛋白的氨基酸序列的显著的遗传变异特征是H111D、S117A、V142L、P171A和E401D;嗜肾IBV-X和N株核衣壳蛋白的氨基酸序列的显著的遗传变异特征是A46S、A48P、L189R、N190S、E220D、I223A、V236Y、S237K、K240Q、Q286R、T299K、R301E、E334D、V335E、V336P和T351S.
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感染CDV的犬病料N、H、F基因的克隆与序列分析
目的 了解病料中犬瘟热病毒(CDV)的变异情况,为犬瘟热的预防与治疗提供理论依据.方法 采用RT-PCR方法对犬病料中CDV的血凝素蛋白(H)、融合蛋白(F)和核农壳蛋白(N)基因进行扩增,将扩增产物克隆到pGEM-T-easy载体中测序,并进行序列分析.结果 测定一株CDV的H、F和N基因大小分别为1863 bp、1653 bp和2235 bp.同源性分析表明,未发现碱基的插入和缺失.该病毒的H、F和N基因分别与国内强毒株BJ080127株的H基因、GN株的F基因和HL株的N基因亲缘关系近,氨基酸同源性分别为97.3%、97.7%和99.3%.与国外标准野毒株A75-17在核苷酸水平上同源性依次为94.4%、93.8%和97.2%,与疫苗株CDV3在核苷酸水平上同源性分别为88.5%、88.8%和93.9%.系统进化树表明该病毒与国内强毒株在同一谱系.糖基化分析显示,该病毒在F基因3～5位氨基酸处多出1个糖基化位点.结论 本研究从犬病料中成功克隆了犬瘟热病毒血凝素蛋白、融合蛋白和核衣壳蛋白,在F基因中新增了一个糖基化位点,为犬瘟热的遗传变异和流行学研究提供了分子生物学依据.
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新城疫病毒NP蛋白的真核表达载体的构建
目的研究新城疫病毒核衣壳蛋白基因的生物学作用及其抗人喉鳞癌的作用.方法利用含有新城疫病毒V4株核衣壳蛋白基因cDNA的原核质粒pUVNP4及真核质粒pcDNA3,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子、BGHpolyA信号序列的表达新城疫病毒核衣壳蛋白的真核表达质粒.结果酶切分析表明重组质粒中含有新城疫病毒V4株核衣壳蛋白基因.结论重组质粒为表达新城疫病毒核衣壳蛋白基因的真核质粒.
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的克隆及高效表达
本试验参照GenBank公布的Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)VR2332株的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,应用RT-PCR方法扩增出了PRRSV的核衣壳蛋白基因(N基因).在对N基因及pET32a载体双酶切后进行连接,构建了高效原核表达载体pETN.将pETN重组质粒转化BL21(DE3)宿主菌后,对培养条件及诱导表达条件(IPTG佳浓度、作用时间)等影响表达的因素进行优化,实现了PRRSV核衣壳蛋白基因的高效表达.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白基因 扩增 原核表达载体 -
家蚕核型多角体病毒中国株和日本株vp39基因的比较研究
以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的核衣壳蛋白基因vp39设计引物,用PCR技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株(BmNPV-Ch)～1.3kb片段,并测定了其全序列长1230bp.推导的氨基酸351个,其与BmNPV日本株(BmNPV-Ja)vp39基因核苷酸序列同源性达97.5%,氨基酸同源性达97.1%.该片段在E.coli BL21中诱导表达能产生分子量约为38kD 的特征性蛋白带,证明所扩增片段为BmNPV-Ch的vp39基因.经与BmNPV-Ja比较,其625位有3个核苷酸(CGA),985～910位有6个核苷酸(GTCGGC)的插入,未造成码组移动.有17处点突变,但取代突变(replacement mutation)仅7处,对两株病毒VP39蛋白的亲疏水性和酸碱性质未产生显著影响.由于点突变带来氨基酸改变,使BmNPV-Ch的vp39蛋白的α-螺旋由13.2%增加到15.4%,无规卷曲由7.2%减少到5.8%,β-折叠和β-转角维持不变,约为79.6%,仍保持以β-折叠为主要二级结构单元的片层状折叠结构.
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质粒介导的核衣壳蛋白siRNA干扰A型流感病毒复制的研究
A型流感病毒(Influenza virus)属于正粘病毒科流感病毒属,可引起鸟类、多种禽类、人类和低等哺乳动物的严重疾病[1],该病毒基因组为负链单股RNA病毒, 分8个节段,容易引起抗原漂移和抗原变异,现有的疫苗和药物不能有效的控制该病毒感染.
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水稻草矮病毒核衣壳蛋白基因克隆及在大肠杆菌中的表达
水稻草状矮化病于70年代曾在南亚、东南亚大面积发生,给当地的水稻生产造成严重损失,在我国也有分布[1].其病原是水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV),为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员,病毒粒体丝状,由核衣壳蛋白和基因组RNA组成[2].基因组含六个ssRNA片段,均为双义编码[3,4],其中RNA5的毒义互补链编码核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NCP)[3].本文报道应用RT-PCR技术获得RGSV沙县分离株(RGSV-SX)NCP基因的cDNA克隆,并得到其在大肠杆菌中的表达产物.
