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寨卡病毒新型疫苗的研究进展
寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染可造成胎儿小头症及成人格林巴利综合症,世界卫生组织已将其定为世界公众健康紧急事件.因此急需要发展新型Zika疫苗.本文简要介绍寨卡病毒生物学性状、流行病学、临床表现,并重点对寨卡病毒3种新型疫苗(DNA、病毒载体、mRNA疫苗)研究进展进行综述与应用展望.
关键词： 寨卡病毒(ZIKV) DNA疫苗 病毒载体疫苗 mRNA疫苗 -
mRNA疫苗冲击树突状细胞诱导抗肿瘤免疫反应的研究
目的:以消化道肿瘤组织mRNA冲击自体DC,诱导特异性免疫应答.方法:20例消化道肿瘤患者外周血分离PBMC(外周血单核细胞),在IL-4、GM-CSF联合作用下诱导DC,从消化道肿瘤组织中提取mRNA并分别在有脂质体或无脂质体介导下冲击DC,与未经纯化的T细胞混合培养,诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞).以CTL作为效应细胞,以胃癌细胞系803为靶细胞,LDH释放实验检测杀伤活性.结果:细胞表面标记检测显示诱导前后CD3、CD4、CD14显著下降,CD40、CD86、CD1a、CD83、HLA-DR显著升高,表明IL-4、GM-CSF联合作用下有效诱导出DC,混合淋巴细胞增殖实验表明该DC具有抗原递呈,刺激淋巴细胞增殖的功能.经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应与未经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应比较,其杀伤率经统计学分析无显著性差异.而二者与单纯经IL-2诱导的未经纯化的T细胞产生的非特异性杀伤比较均有显著性差异.结论:以肿瘤细胞mRNA冲击DC诱导CTL可有效杀伤肿瘤细胞,有可能成为一独特的免疫治疗方法.
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粉尘螨变应原Der f 1 mRNA对小鼠特异性免疫治疗的实验研究
目的 探讨粉尘螨变应原Derf1mRNA疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果.方法 50只BALB/c小鼠随机分为5组(10只/组),分别为PBS组、Derf1变应原致敏组、Derf1变应原免疫治疗组、β-actin mRNA免疫治疗组和Derf1 mRNA免疫治疗组.分别于第0、第7和第14天,PBS组小鼠腹腔注射PBS,其余4组小鼠则腹腔注射10 μgDer f 1进行致敏,建立小鼠哮喘模型.自第21天起,除PBS组小鼠雾化吸入PBS,其他4组小鼠均雾化吸入100 μg/mlDerf1变应原,30 min/次,1次/d,连续7d,观察并记录小鼠哮喘发作情况.5组小鼠于后1次雾化吸入致敏2周后,背部皮下分别注射100 μl PBS、1μg Derf1(维持致敏)、10 μg Derf1(免疫治疗)、2μg β-actin mRNA和2μg Derf1mRNA,1次/周,连续3周.后1次皮下注射后2周处死小鼠.收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测γ干扰素(IFN-γ)和白介素13 (IL-13)水平,并计数嗜酸粒细胞(EOS);收集各组小鼠脾组织,分离脾细胞,除PBS组外,其他4组均加入10 μg/ml Der f 1培养72 h,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-13水平;取各组小鼠眼球血,ELISA法检测血清中总IgE以及变应原特异性IgE (sIgE)、IgG1(sIgG1)和IgG2a (sIgG2a)抗体水平.HE染色观察各组小鼠肺组织切片. 结果 除PBS组外,其他4组小鼠雾化吸入致敏后,均出现急性哮喘发作症状.小鼠BALF中,Derf 1 mRNA免疫治疗组和Derf 1免疫治疗组的IFN-γ水平分别为(897.56±105.73)和(864.48±70.62) pg/ml,均明显高于Derf 1变应原致敏组[(209.05±52.28) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(219.47±64.72) pg/ml](P＜0.01);两者IL-13水平分别为(241.64±31.41)和(321.94±41.07) pg/ml,则明显低于Derf1变应原致敏组[(520.62±43.77) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(507.22±42.26) pg/ml] (P＜0.01);两者EOS数量分别为(1.33±0.44) ×105和(1.48±0.39) ×105个/ml,均明显低于Derf1变应原致敏组[(3.54±0.52) ×105个/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(2.98±0.53)×105 个/ml](P＜0.01).脾细胞培养上清的ELISA检测结果显示,Derf 1 mRNA免疫治疗组和Derf 1免疫治疗组的IFN-γ水平分别为(420.91±69.92)和(334.92±43.72) pg/ml,明显高于Derf1变应原致敏组[(123.75±15.48) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(128.84±59.00) pg/ml](P＜0.01);两者IL-13水平[(268.51±40.42)和[(285.26±62.21) pg/ml]则显著低于Derf1变应原致敏组[(613.89.±.51.54) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(524.05±39.12) pg/ml] (P＜0.01).血清中抗体水平的ELISA检测结果显示,Derf 1 mRNA免疫治疗组的总IgE、sIgE和sIgG1抗体水平分别为(33.72±9.78)、(22.76±8.09)和(17.87±7.59) ng/ml,均显著低于Derf1变应原致敏组[(94.34±11.66)、(65.67±9.47)和(75.18±9.52)ng/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(86.48±10.26)、(62.36±8.35)和(69.51±8.98) ng/ml] (P＜0.01);其sIgG2a抗体水平为(7.74±0.88) ng/ml,则明显高于Derf1变应原致敏组[(2.81±1.17) ng/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(1.06±0.11) ng/ml](P＜0.01).肺组织切片HE染色镜检结果显示,与Derf1变应原致敏组相比,Derf1 mRNA免疫治疗组小鼠的气道上皮和肺泡上皮细胞结构基本完整,炎症细胞浸润明显减少.结论 Derf1mRNA疫苗可有效纠正Th1/Tn2失衡.
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膀胱肿瘤细胞mRNA致敏的树突状细胞体外抗肿瘤免疫反应
目的:研究小鼠膀胱癌BTT739细胞mRNA致敏的树突状细胞(DC)诱导特异性的抗肿瘤免疫反应.方法:使用rmGM-CSF和rmIL-4培养诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,从BTT739细胞中提取mRNA致敏DC,与小鼠淋巴细胞混合培养以诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).采用MTT比色法和软琼脂法检测CTL对BTT739细胞的杀伤作用.结果:MTT比色法和软琼脂法检测结果显示:在靶细胞∶效应细胞不同浓度组中,BTT739实验组和对照组的OD值和肿瘤集落形成个数都有显著性差异(P<0.01,P<0.05),在靶细胞∶效应细胞的比例为1∶ 5、1∶ 25、1∶ 50和1∶ 100时,其杀伤率分别为 25.0%、36.1%、45.9% 和 58.2%;当效应细胞作用于AGS细胞时,其OD值无显著差异.结论:以膀胱肿瘤细胞mRNA致敏DC诱导CTL可有效杀伤膀胱肿瘤细胞.
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mRNA疫苗研究进展及挑战
相对于DNA疫苗,mRNA疫苗是一种比较安全的新型核酸疫苗.mRNA疫苗的分子设计及化学修饰的研究目前主要集中于增强其稳定性和降低其免疫原性.mRNA疫苗的传递主要包括脂质体、非脂质体、病毒、纳米颗粒等.新的传递方法也在不断产生.mRNA疫苗用于肿瘤、感染性疾病等的防治研究表明其具有良好的效果,有较好的应用前景.本文概述了mRNA疫苗近年来研究的新进展及其挑战,并对该领域的研究趋势进行了展望.
