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心虚证大鼠心肌荧光组织化学及超微结构的实验研究
目的:观察心虚证对心肌细胞微细结构及超微结构的影响.方法:选用健康大鼠随机分为造模组和对照组,于造模48h、72h分别取心肌组织作冰冻切片、超薄切片,采用荧光组织化学及电镜技术,观察心肌细胞内糖原和DNA的分布、含量及超微结构的变化.结果:心虚证造模组大鼠的心肌细胞在48h后过碘酸-Schiff反应(荧光PAS反应)明显减弱,72h后DNA荧光反应阳性物明显低于对照组;电镜观察心肌细胞内线粒体肿胀、变形,嵴断裂,数量减少,基质密度降低,肌原纤维有断裂,糖原减少.经立体学定量分析,线粒体体密度与对照组相比差异有显著性(P＜0.01).结论:心虚证可导致心肌细胞的损伤,影响心肌代谢及细胞结构.本研究为心虚证的病因病机学提供一定的实验依据,可指导临床治疗.
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湖北钉螺体内酚氧化酶及其组织学定位
目的 了解湖北钉螺体内是否存在酚氧化酶(PO),并观察其在钉螺体内分布情况.方法 酶组织化学染色法:湖北钉螺成螺(雄螺和雌螺)采自芜湖江滩,解剖后,将软体组织置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,37 ℃孵育,体视显微镜下观察PO与底物反应后的产物在螺体内的分布情况.荧光组织化学染色法:解剖后的湖北钉螺成螺软体组织置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8 )中,37 ℃孵育30 min,吸去邻苯二酚,加入0.05%戊巴比妥钠溶液,5 min后置荧光显微镜下观察PO催化产生的荧光物质在螺体内的分布情况. 结果 酶组织化学染色法显示钉螺的肝脏初为淡浅灰色,5 min时呈现浅灰色,15 min时呈现灰色,30 min时呈现黑色.荧光组织化学染色法显示钉螺的肝脏表面呈现荧光反应.结论 湖北钉螺体内存在PO,雌、雄螺体内的PO均定位于肝脏.
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日本血吸虫酚氧化酶的组化定位研究
目的观察酚氧化酶(phenol oxidase,PO)在日本血吸虫成虫的组织学分布.方法酚氧化酶组化方法:将42 d虫龄的日本血吸虫活成虫置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,37℃孵育30 min后,转移虫体至载玻片上,吸去虫体表面液体,将其中一部分虫体置Olym-pus显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.荧光组织化学方法:经上述过程处理后,在另一部分虫体上滴加2滴含0.05%戊巴比妥钠的PBS溶液,然后置Leica荧光显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.结果酶组织化学方法显示,日本血吸虫酚氧化酶仅分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现棕褐色显色反应;雌虫卵巢和雄虫均未发现酚氧化酶活性.然而,荧光组织化学方法显示,酚氧化酶除主要分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现强荧光外,还少量分布于雄虫体壁表层,呈现弱荧光反应.结论不仅日本血吸虫雌虫含有酚氧化酶活性,而且雄虫也含酚氧化酶活性,只不过其含量少、活性低.荧光组织化学方法能更灵敏地显示日本血吸虫酚氧化酶活性,更适用于日本血吸虫酚氧化酶的组织学定位.
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局部脑淋巴滞留的荧光组织化学观察
目的:通过荧光组织化学方法,观察局部脑淋巴滞留后血管周围间隙(VRS)特点及BSA在VRS内循环分布规律.方法:40只SD雄性大鼠,分为24、48 h假手术组(各10只),24、48 h模型组(各10只);模型组采用脑表浅动脉半结扎术造成局部淋巴循环障碍;假手术组开颅分离浅表动脉而不行半结扎.分时间点做冰冻切片,荧光显微镜下观察BSA在VRS内分布规律,进行扩张VRS计数,统计分析.结果:荧光显微镜下,BSA多聚集在VRS中,在半结扎皮层下VRS中BSA更为集中.模型组相应皮层及皮层下可见明显扩张的VRS,扩张数目与假手术组相比显著增多(P<0.01);24、48 h假手术组之间无明显差异(P>0.01).结论:脑局部淋巴循环受阻可引起相应部位的VRS扩张,VRS是颅内淋巴循环路径之一.
