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甲亢宁胶囊对Graves病小鼠甲状腺功能及Akt/mTOR信号通路的影响
目的 观察甲亢宁胶囊干预下Graves病小鼠甲状腺功能的改善情况及Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及磷酸化mTOR (p-mTOR)表达变化,探讨甲亢宁胶囊治疗Graves病可能的分子机制.方法 用表达促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor)A亚单位的重组腺病毒(Ad-TSHRα-28g)免疫BALB/c雌鼠建立Graves病动物模型.将70只造模成功小鼠按随机数字表法分为模型组(20只)、甲亢宁胶囊干预组(中药组,25只)、甲巯咪唑片干预组(西药组,25只),另设正常对照组(正常组,15只)和空载病毒对照组(空载组,20只,注射Ad-null).中药组予1.5 g/(kg·d)甲亢宁胶囊混悬液灌胃,西药组予2.5 mg/(kg·d)甲巯咪唑混悬液灌胃,其余各组每日子同体积生理盐水灌胃,药物干预5周.各组终选取6个样本,观察小鼠甲状腺组织的病理变化;放射免疫法测定小鼠血清甲状腺素(thyroxine,T4),三碘甲状腺素原氨酸(triiodothyronine,T3),促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)及促甲状腺激素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)水平;Western blot法测定小鼠甲状腺组织Akt、p-Akt、mTOR及p-mTOR的表达量.结果 (1)模型组甲状腺呈增生性改变,滤泡增大,大小不一,间质血管浸润.中药和西药组甲状腺组织结构明显恢复,滤泡增生有所缓解.(2)与正常组、空载组比较,模型组TRAb、T4及T3水平升高(P＜0.01),p-Akt/β-actin、p-Akt/Akt、p-m TOR/β-actin及p-m TOR/m TOR比值均升高(P＜0.01);与模型组比较,中药和西药组TRAb、T4及T3水平均降低(P＜0.01),中药组p-m TOR/β-actin、p-mTOR/mTOR比值均降低(P＜0.01),西药组p-Akt/β-actin、p-Akt/Akt、p-mTOR/β-actin及p-mTOR/mTOR比值均降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 甲亢宁胶囊能降低Graves病小鼠甲状腺激素水平,降低mTOR的表达,其改善Graves病小鼠甲状腺功能的机制可能与这一影响有关.
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益气活血方对心肌缺血大鼠Akt/mTOR信号通路的影响
目的 依托大鼠心肌缺血模型,探讨蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路在心肌中的表达及益气活血方对其的作用机制.方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组、益气活血方组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死模型,术后第2天灌胃给药.以第7、28天为观测时间点.超声检测各组大鼠心脏功能和结构的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,Western blot、RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠心肌梗死区边缘Akt、mTOR及磷酸化表达水平.结果 第7、28天,与假手术组相比,模型组大鼠心脏左室射血分数(LVEF)、左室短轴率(LVFS)显著降低(P<0.01),第7天模型组大鼠左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P<0.01),第28天模型组大鼠LVESV和左室舒张末期容积(LVEDV)显著增大(P<0.01);与模型组相比,各给药组第28天LVEF、LVFS升高,LVEDV和LVESV显著降低(P<0.01).模型组梗死区边缘室壁变薄,心肌细胞数量减少,心肌细胞排列紊乱,炎性细胞浸润;各给药组梗死区边缘心肌细胞排列紊乱,心肌细胞数量减少.模型组磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR值增高(P<0.05),Akt、mTOR mRNA表达显著增高(P<0.01),p-Akt、p-mTOR阳性细胞率明显增高(P<0.01);各给药组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值增高(P<0.05),Akt、mTOR m-RNA表达增强(P<0.05或P<0.01),各给药组均可明显提高p-Akt、p-mTOR阳性细胞率水平(P<0.05).结论 益气活血方能够改善心肌缺血大鼠心脏功能,可能通过激活心脏自我保护机制Akt/mTOR信号通路产生保护心肌细胞的作用.
关键词： 急性心肌梗死 益气活血方 蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路 大鼠 -
雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的影响及机制研究
目的：研究雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的影响及其机制。方法：将HeLa细胞分为对照组和雷帕霉素低、中、高剂量（10、30、100 nmol/L）组，药物作用48 h后，MTT法检测细胞活力，计算抑制率；Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot法检测细胞中蛋白激酶B（Akt）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）磷酸化水平，以及基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、波形蛋白（Vimentin）、钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果：与对照组比较，雷帕霉素各剂量组细胞的抑制率增加（P＜0.01），迁移细胞数目和侵袭细胞数目减少（P＜0.01），MMP-2、MMP-9、Vimentin表达水平降低（P＜0.01或P＜0.05），E-cadherin表达水平增强（P＜0.01或P＜0.05），Akt及mTOR磷酸化水平降低（P＜0.01）。结论：雷帕霉素可通过Akt/mTOR信号通路抑制HeLa细胞的侵袭转移。
关键词： 雷帕霉素 蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路 宫颈癌Hela细胞 侵袭 转移
