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RP-HPLC测定theacrine的血药浓度
目的:测定theacrine灌胃后在大鼠血浆中的血药浓度.方法:采用RP-HPLC检测血浆样品,以咖啡因为内标.色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水(25∶75)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为290nm,柱温为25℃.结果:Theacrine 血浆中质量浓度在0.5～100 mg·L-1线性关系良好(R2=0.998 9),低定量限为0.5mg·L-1.在theacrine 血浆质量浓度为0.5,5.0,50 mg·L-1时,日内、日间精密度均小于15％,提取回收率分别为(95.8士8.6)％,(92.5士5.0)％,(90.3±5.2)％.当给药质量浓度为30 mg · kg-1时,主要药动学参数为Cmax(35.45±2.68) mg·L-1,tmax(0.51±0.13)h,t1/2(3.13±1.37)h,AUC0-∞(265.39±94.71) mg.L-1·.结论:经过系统的方法学考察,该研究所建立的测定方法灵敏度较高、重复性良好,可为theacrine在体内的代谢研究提供依据,为探讨theacrine作用机制及药效学评价奠定基础.
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1,3,7,9-四甲基尿酸激活SirT3/AMPK/ACC信号通路减少高脂饮食小鼠肝脏脂肪化
目的：研究嘌呤生物碱1,3,7,9-四甲基尿酸( theac-rine)对高脂饮食小鼠肝脏甘油三酯蓄积的影响,并进一步探讨其作用机制。方法 C57BL/6J小鼠高脂喂养17周诱导单纯性脂肪肝模型,连续6周给予theacrine后,分别对肝组织切片进行 HE 和苏丹 IV 染色,测定肝脏中甘油三酯(TG)水平,用Western blot 法检测肝脏中SirT3蛋白表达、 AMPK 及ACC 蛋白的磷酸化水平。应用compound C 抑制 HepG2细胞中AMPK 磷酸化,检测theacrine 干预后相关蛋白的表达。结果摇Theacrine 能减少高脂饮食小鼠肝脏中TG 水平,改善肝脏脂肪变性状态,增加肝脏中SirT3蛋白表达及 AMPK 和ACC 蛋白的磷酸化水平。抑制细胞内AMPK 的磷酸化后,theacrine 仍能激活SirT3,但抑制了ACC 的磷酸化作用。结论摇Theacrine 对SirT3的激活不依赖于AMPK 的激活,而对ACC 的磷酸化依赖于AMPK 的激活。其改善高脂饮食小鼠肝脏脂肪化的作用可能与激活SirT3/ AMPK/ ACC 信号通路相关。
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嘌呤类生物碱Theacrine对SIRT3调节的脂肪酸代谢相关基因影响
目的 探讨嘌呤类生物碱1,3,7,9-四甲基尿酸(Theacrine)对Sirtuin3(SIRT3)调节的脂肪酸代谢相关基因的影响.方法 对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,并在诱导的第5天对细胞培养液中加入不同浓度的Theacrine孵育,采用实时荧光PCR(RT-PCR)方法测定细胞内SIRT3及脂肪酸代谢相关基因的表达.并对正常小鼠灌胃给予低、中、高剂量的Theacrine(10,20,40 mg· kg-1)及Caffeine(20 mg·kg-1)1h后,采用RT-PCR测定小鼠肝脏组织、棕色脂肪组织中SIRT3及脂肪酸代谢相关基因LCAD、ATP5c、UCP1、HTGL、FABP4等基因的表达,同时采用Western Blotting检测肝脏中SIRT3的蛋白表达.结果 与正常对照组比较,Theacrine可以上调3T3-L1前脂肪细胞在分化过程中SIRT3、LCAD、FABP4、LPL的表达.低剂量的Theacrine可显著上调小鼠肝脏中SIRT3基因,高剂量则表现为抑制作用,与其蛋白表达结果一致.同时,低、高剂量的Theacrine分别显著提升及抑制小鼠肝脏中LCAD、FABP4、HTGL、ATP5c等基因表达.此外,低剂量的Theacrine对小鼠棕色脂肪中SIRT3、LCAD等基因表达的影响不大,但显著上调了UCP1的基因表达.结论 一定剂量的Theacrine能调节相关基因影响脂肪酸代谢,该作用可能与其上调SIRT3的表达相关.
