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雷公藤乙酰CoA酰基转移酶基因全长cDNA克隆及表达分析
研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据库设计引物,对雷公藤悬浮细胞乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyl-transferase)基因TwAACT进行全长cDNA(GeneBank:KP297934)克隆以及生物信息学分析和基因表达分析.克隆得到TwAACT cDNA全长为1 704 bp,编码405个氨基酸,等电点为6.10,相对分子质量为41.20 kDa,在线预测表明TwAACT具有2个催化活性位点.雷公藤悬浮细胞经茉莉酸甲酯(MeJA)外源诱导后,通过荧光定量PCR表明,TwAACT相对表达量明显增加,在24h达到高.研究首次克隆得到雷公藤AACT基因,为进一步阐述雷公藤萜类生物合成途径奠定基础.
关键词： 雷公藤 乙酰CoA酰基转移酶 克隆 生物信息学分析 基因表达分析 -
丹参乙酰CoA酰基转移酶基因全长克隆和SNP分析
乙酰CoA酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)为萜类化合物生物合成甲羟戊酸(MVA)途径的起始酶,催化使2个分子的乙酰CoA缩合为乙酰乙酰CoA.利用基因芯片结合RACE方法,从丹参毛状根中得到一个AACT基因(SmAACT,accession No.EF635969),该基因全长1 623 bp,含有1个1 200 bp的开放阅读框(open reading frame,ORE),编码399个氨基酸,对应基因组序列含有9个内含子.序列同源性分析和分子进化分析表明SmAACT是一种与植物类异戊二烯MVA途径相关的蛋白,其表达量受到生物和非生物诱导子酵母和Ag+的诱导,并伴随丹参酮类成分积累.在丹参根、茎、叶中均有表达,根中的表达量明显高于茎和叶中的表达量.单核苷酸多态性分析表明,在第6至第9内含子约600 bp范围内,SmAACT共存在33个多态位点,且表现出产地特异基因型.该基因的克隆分析为研究丹参酮类成分的次生代谢调控机制奠定了基础.
关键词： 丹参 乙酰CoA酰基转移酶 单核苷酸多态性
