首页 > 文献资料
-
基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌
目的 建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法.方法 通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性.同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测.结果 利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性.对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应.在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml.结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值.
关键词： 猪霍乱沙门菌 荧光定量反转录-聚合酶链反应 检测 -
实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达
目的 建立检测人广泛型线粒体肌酸激酶(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,uMtCk)mRNA荧光定量的方法,并检测了结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织中uMtCk基因表达的水平.方法 基于TaqMan荧光探针技术,以GAPDH作为内参,建立实时荧光定量RT-PCR方法,并检测了30名结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织 uMtCk mRNA的表达.结果 30例结直肠肿瘤患者肿瘤组织中有uMtCk mRNA的表达, 范围为7.4×105 ～5.3×108拷贝/μg RNA, 均值为(9.4±5.7)×106拷贝/μg RNA; 30例癌旁组织uMtCk表达为 4.5×103～6.9×105 拷贝/μg RNA, 均值为(8.6±3.4)×104拷贝/μg RNA.结论 成功地建立了人uMtCk基因表达含量的荧光定量检测方法,检测结果可用绝对拷贝数表示,定量准确可靠.且结直肠腺癌病人肿瘤组织uMtCk mRNA的含量是升高的,提示uMtCk mRNA含量的检测有助于结直肠腺癌病人临床诊断.
