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肠出血性大肠埃希菌0157:H7文献资料
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琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究
目的 探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值.方法 分别以10倍连续稀释的0157:H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR).用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的低检测限.结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株:stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(2)cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(2)cfu (12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(-1)cfu (56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(-1)cfu (12.65 fg)/PCR体系.结论 用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍.
