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琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究
目的 探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值.方法 分别以10倍连续稀释的0157:H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR).用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的低检测限.结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株:stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(2)cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(2)cfu (12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(-1)cfu (56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(-1)cfu (12.65 fg)/PCR体系.结论 用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍.
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中国脑膜炎奈瑟菌中插入序列1301的分布与分子流行病学研究
目的 研究中国脑膜炎奈瑟菌(Nm)中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征.方法 设计IS1301引物,应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301,对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对,PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析及核酸印迹杂交,研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征.结果 219株Nm菌株中,34株携带IS1301(15.53%),A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11.11%、20.75%、6.17%和28.57%;IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号ZA9092.1的Nm菌株序列相似度为94%～100%,进化树分析可分为两簇;C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别;研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝,相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征.结论 IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性.
关键词： 脑膜炎奈瑟菌 插入序列IS1301 脉冲场凝胶电泳 核酸印迹杂交 -
巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化
目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在大鼠周围神经损伤后的表达变化,探讨MIF在周围神经损伤后再生中的作用.方法通过核酸印迹杂交的方法了解MIF在神经损伤后表达的变化,并对损伤后4 d的神经进行免疫组化分析,观察其表达部位的改变.结果① MIF在神经损伤后出现空间和时间上的动态变化.在神经损伤后4 d,其MIF表达的部位与正常坐骨神经表达的部位不同.在神经损伤的远端,MIF存在于吞饮髓鞘碎片的雪旺细胞中.而在损伤神经的近端,MIF不仅存在于雪旺细胞中,同时在轴突内也有较高水平.② 对神经损伤后MIF mRNA的杂交定量分析显示,在损伤后的12 h内,MIF的mRNA水平维持在较低水平,24 h后骤然上升至高水平并在1周内维持较高水平,之后回落至正常水平.结论 MIF在周围神经损伤-再生过程中可能起着相当重要的作用.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 免疫组化 核酸印迹杂交
