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胎肾对大鼠去卵巢所致骨质疏松症的实验研究
目的:观察胎肾对大鼠去卵巢所致骨质疏松症(0P)的作用.方法:48只SD雌性大鼠随机分为5组:假手术组(A)组、模型(B)组、尼尔雌醇(C)组、胎肾活细胞(D)组和胎肾死细胞(E)组.A组行假手术,其余各组行去卵巢手术造模.术后12周,A组、B组用0.9％氯化钠溶液干预,C组用尼尔雌醇干预,D组用胎肾活细胞悬液干预,E组用胎肾死细胞悬液干预.4周后,取血清行雌激素(E2)、骨钙素(BGP)及骨Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTX)检测,取右侧胫骨测量骨长、骨干重、骨灰重.结果:与A组比较,B组血清中E2、BGP水平均显著降低(P＜0.01),血清NTX水平显著升高(P＜0.01),同时骨长度、骨干重、骨灰重均显著降低(P＜0.01);与B组比较,D组、E组血清中E2、BGP水平均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),E组骨干重、骨灰重显著增加(P＜0.05,P＜0.01).结论:胎肾具有治疗大鼠去卵巢所致OP的作用,可能通过促进骨形成、增加骨量实现的.
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改良法人胎肾小球系膜细胞原代培养
目的:原代培养和鉴定正常人胎肾小球系膜细胞(HMC).探索和总结佳培养方法.方法:取4月胎龄的引产胎儿肾,分赢皮质后,筛网滤过分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化,接种肾小球时分别采用传统方法(第1组)和预先浸湿瓶底并以胎牛血清中和肢原酶替代离心洗涤(第2组)两种方法.观察系膜细胞生长状态.并采用免疫细胞化学检测第3代肾小球系膜细胞的结蛋白(Desmin)、肌动蛋白(Actin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子(FactorⅧ)等相关抗原的表达,鉴定系膜细胞,并绘制其生长曲线,计算倍增时同.结果:两组肾小球贴壁率分别71%和90%,系膜细胞开始爬出时间为II d和7 d.次代倍增时间为3.94 d和3.52 d,细胞生长状况有统计学差异.第2组传代的系膜细胞1 d内贴壁,1周后长满.细胞呈三角、梭形、不规则形半透明,树枝状突起.免疫化学鉴定Desmin、Vimentin和Actin 阳性,FactorⅦ和Cytokeratin阴性.结论:两种肾小球接种方法对系膜细胞培养有不同影响.我们总结改进的培养方法肾小球贴壁率高,细胞存活和生长良好,并确定培养的细胞为人HMC.
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人肾小球系膜细胞原代培养及鉴定方法的研究
目的:建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法.方法:取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞.同时采用形态学观察和免疫荧光技术,对鼠抗人结蛋白,鼠抗人角蛋白进行鉴定,采用MTT、流式细胞仪技术对不同来源肾脏的系膜细胞生长状况进行比较.结果:形态学、免疫荧光法鉴定表明培养细胞为肾小球系膜细胞,胎肾原代培养后8～10 d即可传代,而成年肾脏原代培养后需15～16 d方可传代.成年肾脏培养细胞至第4代细胞生长缓慢,贴壁能力减弱,出现死亡.而胎肾培养细胞则可继续培养至第7～10 代.结论:三层滤网法分离人肾小球系膜细胞,方法简单、高效,培养的原代肾小球系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特性,且进一步证明胚胎组织比成年个体肾脏原代细胞培养容易成功.
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肿瘤坏死因子-α在宫内急性缺氧缺血后胎鼠肾脏炎性反应发生中的作用
目的探讨宫内急性缺氧缺血后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在胎鼠肾脏炎性反应发生中的作用.方法通过钳夹孕21日龄大鼠供应子宫的血管,制备胎鼠宫内不同程度缺氧缺血(HI)模型和再灌注不同时间模型;利用酶联免疫分析方法和化学方法测定胎肾组织匀浆中TNF-α和髓过氧化物酶(MPO)的变化;同时观察肾组织形态学改变.结果1.宫内HI后胎肾TNF-α水平上升,在缺血35～45 min时明显(P＜0.05)o缺血15 min后再灌注1 h胎肾TNF-α水平即开始显著升高(P＜0.01),8 h达高峰,30 h接近假手术组.2.胎肾MPO活力随缺血程度加重而略渐升高,缺血45 min时明显(P＜0.05).缺血15 min再灌注4 h时胎肾TNF-α水平即明显升高(P＜0.05),15 h达高峰(P＜0.01),30 h仍高于假手术组(P＜0.05).3.组织学改变:缺血15 min再灌注15 h病理改变明显,肾组织普遍充血和渗出,可见中性粒细胞浸润,肾小管普遍空泡变性,伴细胞核模糊,细胞崩解,基底膜阶段性断裂,尤以近端小管明显.结论宫内急性缺血和再灌注后胎肾存在炎症反应,TNF-α可能是启动该反应的重要媒介;而MPO可反映炎症反应程度.
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宫内急性缺血缺氧后胎鼠肾脏钙离子腺苷三磷酸酶动态变化的研究
目的研究宫内急性缺血缺氧后(HI)胎鼠肾脏钙离子腺苷三磷酸酶(Ca2+-ATPase)的动态变化,探索围产期窒息后肾损伤发生细胞内钙超载的机制.方法通过钳夹孕21 d大鼠供应子宫的动静脉血管,制成胎鼠宫内不同程度HI模型和HI后再灌注不同时间模型.采用化学方法测定胎鼠肾脏细胞膜和线粒体Ca2+-ATPase的活性变化.结果假手术组胎肾细胞膜和线粒体Ca2+-ATPase活性分别为(7.476±0.353)和(3.470±0.270)微摩尔磷/毫克蛋白@小时(μumol/mgprot.h),宫内HI 15 min后Ca2+-ATPase活性均明显减弱,分别为(6.411±0.210)和(2.886±0.245)μmo1.Pi/mgprot.h,(P＜0.01);与缺血15 min时比较,宫内缺血45 min时酶活性减弱更明显,分别为(5.772±0.177)和(2.500±0.282)μumol.Pi/mgprot.h,(P＜0.05).缺血15 min再灌注过程中,细胞膜和线粒体Ca2+-ATPase活性与缺血时比较继续减弱,8 h时低,分别为(5.513±0.197)和(2.411±0.197)μmol.Pi/mgprot.h,(P＜0.01),15 h时均明显回升,至24h时细胞膜Ca2+-ATPase活性已接近假手术组(P＞0.05),但线粒体Ca2+-ATPase活性(3.234±0.143)μmol.Pi/mgprot.h,仍低于假手术组(P＜0.05).结论宫内HI后胎肾Ca2+-ATPase活性的降低是发生细胞内钙超载导致肾损伤的重要机制.
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宫内窘迫后胎鼠肾脏细胞间粘附分子-1的表达及意义
目的缺血缺氧性肾损伤的发生过程有炎症反应参与,而这种炎症反应的发生与细胞粘附分子有关,其中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)可上游调节并介导白细胞与内皮细胞的粘附而致肾损伤.该文旨在探讨宫内急性缺血缺氧及再灌注时ICAM-1在胎鼠肾脏炎症反应发生中的作用.方法通过钳夹孕21日龄大鼠供应子宫的血管制备胎鼠宫内不同程度缺血缺氧模型和再灌注不同时间模型;利用免疫组织化学技术动态观察ICAM-1的变化,同时应用HE染色观察病理学改变.结果ICAM-1在假手术组胎鼠肾组织即有少量表达,表达部位主要在近曲小管.比较肾皮质近曲小管ICAM-1的表达情况显示:宫内缺血缺氧后,在35 min和45 min表达增强,差异有显著性(P＜0.05).与假手术组相比,宫内缺血缺氧15 min后再灌注2 h,1CAM-1表达即明显增强(P＜0.01),15 h达高峰,再灌注30 h时表达仍强于假手术组(P＜0.05).病理学改变:缺血15 min再灌注15 h病理改变明显,肾组织普遍充血和渗出,可见中性粒细胞浸润,肾小管普遍空泡变性,伴细胞核模糊,细胞崩解,基底膜阶段性断裂,尤以近曲小管明显.结论宫内急性缺血和再灌注后胎肾存在炎症反应;宫内急性缺血缺氧可以导致ICAM-1表达增强,其表达变化与病理学改变一致,提示ICAM-l可能参与急性缺血缺氧性肾损伤时炎症反应的发生.
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三聚氰胺对SD胎鼠肾脏致病性研究
目的:研究三聚氰胺在SD大鼠胚胎发育过程中对胎鼠肾的致病性.方法:将加只SD孕鼠随机分为4个三聚氰胺组和1个对照组,用浓度分别为360、480、600、720mg/(kg·d)三聚氰胺悬液连续灌胃,对照组灌胃2ml蒸馏水.生产后采用ELISA法检测新生鼠血液和肾脏中三聚氰胺含量,常规HE染色观察新生鼠肾组织的病理变化.结果:各组新生鼠血液中均可检测到三聚氰胺;600、720 mg/(kg·d)组新生鼠肾三聚氰胺浓度显著高于对照组.病理组织学检查发现600 mg/(kg·d)组肾小球细胞数量增多,体积增大,髓旁毛细血管扩张充血.720mg/(kg·d)组肾小管和肾盂扩张,未见结石和明显黄色沉淀物.结论:三聚氰胺通过胎盘屏障进入胎鼠体内,沉积在肾脏,对胎鼠肾生长发育具有损伤作用,损伤主要集中在肾小管和肾间质.
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宫内急性缺血缺氧后胎鼠肾脏细胞间粘附分子-1表达的研究
为探讨宫内急性缺血缺氧及再灌注时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在胎鼠肾脏损伤发生中的作用,通过钳夹孕21日龄大鼠供应子宫的动静脉血管以制备胎鼠宫内不同程度缺血缺氧模型和再灌注不同时间模型;利用逆转录聚合酶链式反应动态观察ICAM-1mRNA的变化.结果显示:正常时ICAM-lmRNA在21日龄胎鼠肾脏有一定表达.宫内缺血后,胎肾ICAM-1mRNA在缺血35分钟时开始表达增强(P<0.05),45分钟时达高峰(P<0.01).缺血15分钟再灌注过程中,胎肾ICAM-1mRNA在再灌注1小时时即开始表达增强(P<0.05),8和15小时时为表达高峰,明显强于其它各时间点(P<0.05),此后表达下降,在30小时已接近假手术组水平(P>0.05).因此,可以认为宫内缺血缺氧可以刺激胎鼠肾脏ICAM-1mRNA的转录,提示ICAM-1可能和窒息后肾损伤发病关系密切.
