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羟基红花黄色素A联合黄芪甲苷-Ⅳ对TNF-α诱导内皮细胞凋亡的影响
目的:观察羟基红花黄色素A (hydroxysafflower yellow A,HSYA)联合黄芪甲苷-Ⅳ(astragaloside-Ⅳ,As-Ⅳ)对人重组肿瘤坏死因子-o(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度TNF-α(0,10,20,50μg·L-1),HSYA(0,1×10-6,5×10-6,1×10-5,1×10-4mol·L-1),As-Ⅳ(0,1×10-6,5×10-6,1×10-5,1×10-4 mol·L-1)对细胞活力的影响以及HSYA联合As-Ⅳ(1×10-5mol·L-1)对TNF-α(20 μg·L-1)损伤细胞活力的影响.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度TNF-α对B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3),活化的天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved Caspase-9)蛋白表达的影响,以及HSYA联合As-Ⅳ对上述蛋白表达是否具有改善作用.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导Bcl-2基因表达的影响,免疫荧光技术分析HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导Bcl-2,Bax蛋白表达的影响.结果:与空白组比较,TNF-α在20 μg·L-1时可诱导EA.hy926细胞活力下降,上调Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达;与TNF-α组比较,HSYA联合As-Ⅳ预处理组可减少TNF-α诱导的细胞活力下降,抑制Bax,cleavedCaspase-3,cleaved Caspase-9蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,且HSYA联合As-Ⅳ预处理组对上述指标的改善效果优于HSYA或As-Ⅳ单独预处理组.结论:HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导的EA.hy926细胞凋亡具有抑制作用,且效果优于单药,其机制可能与其下调Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和上调Bcl-2的表达有关.
