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左归丸抗乳腺癌破骨性骨转移机制探讨
目的:研究左归丸的抗乳腺癌破骨性骨转移作用,并探讨其机制.方法:采用左心室注射人乳腺癌MDA-MB-231细胞法建立裸鼠乳腺癌实验性骨转移模型,实验分为空白组、左归丸(21,42 g·kg-1)组,采用巢式PCR特异性扩增裸鼠骨髓中人细胞角蛋白(CK19),确定肿瘤细胞在骨髓组织中的转移情况.体外分离小鼠破骨细胞前体细胞小鼠骨髓巨噬细胞(BMMs),外源性加入核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(sRANKL),模拟肿瘤条件下破骨细胞活化,观察左归丸对破骨细胞活化、组织蛋白酶K(Cathepsin K)分泌以及骨片吸收的影响.采用免疫印迹法(Western blot)检测破骨细胞前体细胞NF-κB受体活化因子(RANK)表达的影响.结果:与空白组比较,左归丸(21,42 g·kg-1)组均可显著抑制乳腺癌骨转移动物骨髓组织中人CK19表达的影响(P＜0.01).体外血清药理学研究表明,左归丸含药血清可显著抑制BMMs分化为具有多细胞核的破骨细胞(P＜0.05),同时可明显抑制破骨细胞分泌Cathepsin K(P＜0.05).10％左归丸含药血清组的骨片吸收窝的数量和面积明显低于正常大鼠血清组(P＜0.05).Western blot实验结果表明,左归丸含药血清可明显抑制RANK蛋白表达(P＜0.05).结论:左归丸具有明显的抗乳腺癌破骨性骨转移作用,RANKL/RANK系统活性可能是其作用机制之一.
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左归丸抗乳腺癌转移及其作用机制
目的:观察左归丸的抗乳腺癌转移作用,探讨其作用机制.方法:采用股骨内注射法建立人乳腺癌细胞MDA-MB-231骨转移裸鼠模型,受试裸鼠随机分为空白组(蒸馏水),左归丸低、高剂量(21,42 g·kg-1)组.连续给药8周后,采用巢式聚合酶链式反应(PCR)检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白(ck19)基因的表达,确定肿瘤转移情况;采用Oris法,检测左归丸含药血清对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移能力的影响;采用重组基底膜侵袭法,观察左归丸含药血清的体外抗侵袭作用;采用Alexa Fluor488(R)标记的鬼笔环肽(Phalloidin)进行荧光染色,观察左归丸含药血清对乳腺癌细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)聚合的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测左归丸含药血清对MDA-MB-231细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)和4型趋化因子受体(CXCR4)表达的影响.结果:与空白组比较,左归丸高、低剂量均可显著抑制小鼠骨髓组织中人ck19基因表达(P＜0.01).Oris迁移表明,左归丸含药血清可显著抑制转化生长因子-β(TGF-β)诱导的MDA-MB-231细胞迁移;重组基底膜侵袭实验显示,左归丸含药血清也可显著抑制乳腺癌细胞对重组基底膜的侵袭能力.给药组侵袭细胞数较空白组显著降低(P＜0.01).Phalloidin荧光染色结果显示,左归丸含药血清可显著抑制F-actin聚合,抑制F-actin聚合体的形成.Western blot结果表明,左归丸含药血清可显著抑制乳腺癌细胞PTHrP,CXCR4蛋白表达.结论:左归丸具有明显的抗乳腺癌骨转移作用,其机制与抑制肿瘤细胞PTHrP,CXCR4表达,从而直接抑制其体外运动活性相关.
关键词： 左归丸 破骨性骨转移 乳腺癌 甲状旁腺激素相关蛋白
