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电针通过抑制下丘脑细胞外调节蛋白激酶5信号通路改善手术创伤大鼠脾脏自然杀伤细胞的功能
目的:观察下丘脑内细胞外调节蛋白激酶(ERK)5信号通路在电针改善手术创伤大鼠脾脏自然杀伤(NK)细胞功能中的作用及机制.方法:SD雄性大鼠随机分为对照组、创伤组、创伤+电针组、创伤+未电针组、创伤+低剂量BIX 02188组、创伤+高剂量BIX 02188组,每组6只.采用手术创伤模型,创伤+电针组选取双侧“足三里”穴,术后立刻电针,创伤+未电针组针刺双侧“足三里”穴,但不接电针仪,均持续30 min,创伤+低剂量BIX 02188组、创伤+高剂量BIX 02188组于造模前1周进行侧脑室埋管,手术创伤前30 min注射BIX 02188.免疫组化法和Western blot法观察下丘脑ERK 5磷酸化水平和蛋白表达,及促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)蛋白表达,乳酸脱氢酶释放法和Real-time PCR法检测脾脏NK细胞杀伤功能及穿孔素(Perforin)和颗粒酶B(Granzyme B)的mRNA表达.结果:创伤组大鼠下丘脑内ERK 5信号通路显著激活,ERK 5磷酸化水平及蛋白表达均升高(P＜0.01,P＜0.05),电针及ERK 5抑制剂均可抑制ERK 5的磷酸化(P＜0.05,P＜0.01);手术创伤后,脾细胞Perforin及Granzyme B的mRNA明显下调,脾脏NK细胞的杀伤活力下降(P＜0.01,P＜0.05),电针治疗可增加Perforin及Granzyme B的基因表达,进而提高脾脏NK细胞的杀伤活力(P＜0.05);下丘脑内CRF的表达在创伤后明显上升(P＜0.01),给予ERK 5抑制剂或电针均可下调其表达(P＜0.01).结论:电针改善手术创伤引起的脾脏NK细胞杀伤活力降低的机制之一可能是下调下丘脑内ERK 5信号通路的激活,减少CRF的产生,从而抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴激活.
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细胞外信号调节蛋白激酶5在慢性氟中毒大鼠大脑中的免疫组织改变
目的 通过检测慢性氟中毒大鼠脑组织分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中细胞外调节蛋白激酶5(ERK5)在大脑不同功能分区中的表达与活性,研究慢性氟中毒脑损伤的相关机制.方法 30只SD大鼠按性别和体重随机分为3组,每组10只.对照组自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低氟组饮水含氟量10 mg/L;高氟组饮水含氟量50 mg/L.实验6个月,观察染氟大鼠氟斑牙情况;用氟离子电极法测量大鼠尿氟含量;通过HE染色观察大鼠皮质及海马区的变化;用免疫组化方法检测大鼠脑组织中皮质区、海马CA3区、海马CA4区中P-ERK5、ERK5的蛋白表达水平.结果 染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,尿氟含量增加(P＜0.05);染氟组大鼠皮质及海马CA3区、CA4神经细胞排列稍紊乱,并有轻度的空泡变性(神经元水肿),高氟组更为严重;高氟组大鼠皮质区P-ERK5蛋白水平高于其他组(P＜0.05),染氟组大鼠海马CA3区与正常组比较有统计学意义(P＜0.05),海马CA4区各组间比较均有统计学意义(P＜0.01);高氟组大鼠皮质区、海马CA3区、海马CA4区ERK5蛋白水平与其他组比较有统计学意义(P＜0.05);另外ERK5的活化水平在海马CA4区有降低的趋势(P＜0.05).结论 慢性氟中毒导致大鼠脑皮质区及海马CA3、CA4区P-ERK5、ERK5蛋白表达水平增加,可能与慢性氟中毒大鼠脑损伤免疫组织改变有一定关系.
关键词： 氟中毒 免疫组化 大鼠 脑组织 细胞外调节蛋白激酶5 -
细胞外信号调节蛋白激酶5在慢性氟中毒大鼠脑组织中的表达及其与大鼠记忆力改变的关系
目的通过观察慢性氟中毒大鼠脑组织中细胞外调节蛋白激酶5 (extracellular-signa1 regulatedkinase 5,ERK5)的表达与活性,及与大鼠学习记忆能力变化的关系,深入探讨慢性氟中毒神经系统损害的发病机制.方法30只SD大鼠按体质量采用随机数字表法分为3组,每组10只,雌雄各半.对照组自由饮用自来水(含氟量＜ 0.5 mg/L),低氟组、高氟组饮水含氟量分别为10.0、50.0 mg/L.实验6个月后,取大鼠脑组织,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测ERK5的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞外ERK5的蛋白表达水平及活性;Morris水迷宫检测慢性氟中毒大鼠学习记忆能力.结果低氟组、高氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,且随着染氟剂量的升高大鼠尿氟含量逐渐升高(F=164.10,P＜ 0.05).对照组、低氟组、高氟组大鼠脑组织磷酸化(p)-ERK5蛋白水平分别是0.13±0.03、0.29±0.10、0.43±0.17,组间比较差异有统计学意义(F=11.96,P＜ 0.05),其中低氟组、高氟组高于对照组(P均＜0.05);总-ERK5蛋白水平分别是032±0.11、0.37±0.13、0.49±0.16,各组间比较差异有统计学意义(F=3.45,P＜0.05),其中高氟组高于对照组(P＜0.05).大鼠脑组织ERK5 mRNA表达水平组间比较差异无统计学意义(F=0.81,P＞0.05).定向航行实验第2、3、4天,大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数组间比较差异均有统计学意义(H=28.20、29.90、26.47,27.23、35.34、27.62,P均＜0.01);第5天空间探索实验,大鼠第1次穿越平台时间、穿越平台次数组间比较差异均有统计学意义(H=31.41、30.80,P均＜0.01).大鼠脑组织p-ERK5蛋白表达水平与大鼠第5天穿越平台次数呈负相关(r=-0.470,P＜ 0.01),而与大鼠第5天第1次穿越平台时间呈正相关(r=0.591,P＜ 0.01).结论慢性氟中毒导致大鼠脑组织中ERK5信号通路发生改变,其改变水平与慢性氟中毒大鼠学习记忆能力的降低存在相关关系.
关键词： 氟中毒 学习 记忆 细胞外调节蛋白激酶5 大鼠 -
促凋亡蛋白Bad和细胞外调节蛋白激酶对膀胱癌多重耐药细胞的作用机制研究
目的 检测人膀胱癌耐药细胞T24/Ifex和亲本细胞T24中细胞外调节蛋白激酶(ERK)1、ERK2、ERK5和Bad的表达,探讨其对膀胱癌细胞多药耐药(MDR)的影响.方法 人膀胱癌耐药细胞株T24/Ifex用小剂量缓慢诱导法诱导;CCK-8法检测T24/Ifex对多种化疗药物的敏感性;Western blot检测MRP-1、P-gp、ERK1、ERK2、ERK5和Bad蛋白的表达;荧光定量PCR检测Bad mRNA的表达.结果 成功建立膀胱癌耐药细胞株T24/Ifex,其对Ifex、DOC和CDDP的耐药指数分别为7.359、3.892和4.297,且高表达MRP-1和P-gp蛋白.与亲本细胞T24比较,T24/Ifex中ERK1、ERK2和ERK5的表达升高,ERK1蛋白磷酸化水平无显著变化,ERK2磷酸化水平下降,且p-ERK1/2与ERK1/2的比值下降.Bad的mRNA和蛋白表达下降.结论 ERKs和Bcl-2家族促凋亡蛋白Bad表达与人膀胱癌MDR的发生密切相关.
