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艾灸血浆对离体人胃黏膜上皮细胞损伤的保护作用及其线粒体细胞凋亡通路机制
目的:探讨艾灸血浆对胃黏膜细胞调亡的影响,揭示艾灸对胃黏膜细胞的保护作用及其信号转导机制.方法:24名健康人随机等分为艾灸穴位组和艾灸非穴位组,分别艾灸中脘、关元和足三里穴及非穴位对照点各10d.将人体胃黏膜上皮(GES-1)细胞分为空白组、模型组、艾灸穴位血浆组、艾灸非穴位血浆组,采用含8%乙醇的培养液造成GES-1细胞损伤模型,分别加以预先提取的灸前人体血浆、艾灸穴位和非穴位血浆.流式细胞技术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测细胞内热休克蛋白70 (HSP 70)、第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活物(Smac),凋亡诱导因子(AIF)的表达;细胞免疫化学法检测半胱氛酸天冬酸蛋白酶-3、9(Caspase-3、9)的表达.结果:模型组与空白组比较,细胞凋亡率明显增加,HSP 70、Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9 表达均上调(均P<0.01);艾灸穴位血浆组与模型组比较,凋亡率明显下降(P<0.01),HSP 70表达进一步提高(P<0.01),Smac、AIF、Caspase-3、Caspase-9 表达下调(均P<0.01);艾灸非穴位血装组与模型组比较,凋亡率、Smac表达下降,Caspase-3、Caspase-9表达也下调(均P<0.01),但高于艾灸穴位血浆组(P<0.05,P<0.01).结论:艾灸中脘、关元和足三里穴位后提取的人体血浆能抑制GES-1细胞凋亡,其信号转导通路可能是:促进细胞内HSP 70合成,通过线粒体凋亡通路,抑制Smac、AIF表达,同时阻断其与Caspase-9的结合,减少Caspase-3含量,抑制细胞凋亡.