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江苏省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒血清流行病学调查
目的 调查江苏省人与动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)血清流行病学情况,为控制疫情提供流行病学线索.方法 2010年7-11月在江苏省南京江宁区、溧水县,常州溧阳市,无锡宜兴市,淮安盱眙县和连云港东海县共采集2853份血清,其中人血清1922份、动物(犬、羊、猪、牛、鹅、鼠和鸡)血清931份,运用双抗原夹心ELISA法检测血清中SFTSV总抗体,并进行不同地区SFTSV总抗体阳性率比较.结果 本次调查2853份血清样本中SFTSV总抗体阳性血清121份,阳性率为4.24%,提示江苏省存在SFTSV的流行.在7种被调查的动物样本中,5种动物(犬、羊、牛、猪、鸡)血清样本SFTSV总抗体阳性,阳性率分别为6.40%、57.14%、31.82%、5.33%和0.98%;人血清中SFTSV总抗体阳性率为0.94%.血清中SFTSV总抗体阳性率存在地区差异.人群与动物SFTSV血清总抗体阳性率存在正相关关系.结论 江苏省是SFTSV的流行区域,需加强SFTSV的预防意识及诊断能力.
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双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体
目的 建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性.方法 将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原.分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA.用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京7)-泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA.结果 有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份.双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%.结论 新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究.
关键词： 丙型肝炎病毒 抗体检测 双抗原夹心ELISA -
三种方法联合检测对SARS的诊断意义分析
目前用于SARS病原学检测的方法主要有血清学和分子生物学方法.本文就巢式RT-PCR检测SARS病毒RNA和两种ELISA法检测特异性抗体情况进行分析.
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经修饰的重组梅毒螺旋体膜蛋白及其应用
目的寻找高灵敏度、高特异性、检测结果定量、简便易行的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测方法. 方法采用重组技术,在现有已公布的梅毒螺旋体基因组中筛选出公认抗原性强的三个基因片段Tpp15、Tpp17、Tpp47进行克隆.为了获得水溶性高、特异性强、可标记性好的重组抗原蛋白,有针对性地设计引物以便对表达的梅毒螺旋体膜蛋白进行修饰和改造,同时在收获高效表达的目的蛋白后采取了一系列针对性切割和高特异性纯化.以纯化的重组梅毒螺旋体膜蛋白(r-KTp15,r-KTp17及r-KTp47)为抗原,建立了诊断梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心酶联检测方法(DAGS ELISA). 结果在大肠杆菌中获得了重组梅毒螺旋体膜蛋白的高效表达,经修饰纯化之后的目标蛋白水溶性提高,特异性增强,可标记性优于常规不修饰的重组蛋白.应用该三种蛋白为抗原建立的双抗原夹心法血清学诊断试剂盒共检测各期梅毒阳性患者210例,灵敏度达98.6%(207/210),检测正常献血者1 327例,特异性达100.0%(1 327/1 327),优于常规梅毒血清学初筛诊断方法RPR及TRUST法,与TPHA法的符合率为100.0%. 结论以双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒在梅毒血清学初筛实验室进行梅毒螺旋体抗体的筛查,在灵敏度、特异性方面优于现用的RPR/TRUST法.因此,该方法值得在梅毒血清学初筛实验室推广.
关键词： 重组梅毒螺旋体抗原 双抗原夹心ELISA -
影响双抗原夹心ELISA法检测HIV抗体因素研究
目的:探讨检测试剂种、批号、仪器、人员、时间对双抗原夹心ELISA法初筛检测HIV抗体是否有显著影响.方法:将相同的15组血清标本及其每组所含的5份不同标本单盲方式随机编号,然后分别采用不同种、同种不同批号、同种同批号试剂,不同时间、仪器、人员双抗原夹心ELISA法检测HIV抗体,经统计学比较OD值是否有显著差异.结果:河南华美试剂:批号、人员、时间对OD值有显著影响.郑州安图、北京万泰试剂:批号、人员、时间对OD值无显著影响,另郑州安图试剂:仪器对OD值也无显著影响.上海科华试剂:仪器、人员、时间对OD值无显著影响,批号对OD值有显著影响.英科新创试剂:人员、大部分批号、时间对OD值无显著影响,只一批号试剂OD值重复性差.英科新创、荷兰梅里埃、珠海丽珠、河南华美、上海科华、郑州安图、北京万泰试剂对OD值有些有显著影响,有些无显著影响.结论:不同种、同种不同批号、同种同批号试剂,不同仪器、人员、时间操作双抗原夹心ELISA法初筛检测HIV抗体的阴、阳性结果无显著差异,但对OD值有不同程度影响.
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四种丙型肝炎病毒抗体试剂检测方法的性能评估
对血液筛查的四种丙型肝炎病毒（ Hepatitis C virus， HCV）抗体试剂检测方法的性能进行评估。方法采用协作标定方式，应用四种检测方法（间接ELISA法、双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法）16种HCV抗体试剂，对经确证筛选出的70份（ HCV抗体阳性35份、阴性35份）血浆样本进行检测，通过分析阳性、阴性符合率，评估四种方法HCV 抗体试剂的性能。结果间接ELISA法试剂检测阳性符合率为88．6％（31／35）～94．3％（33／35），双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法试剂检测阳性符合率为91．4％（32／35）～94．3％（33／35），四种检测方法HCV抗体试剂阳性符合率之间的差异无统计学意义（P＞0．05）；间接ELISA法和间接CLIA法试剂弱阳性样本检出率为11．4％（4／35）～31．4％（11／35），双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂弱阳性样本检出率为5．7％（2／35）～11．4％（4／35），四种检测方法HCV抗体试剂对弱阳性样本的检出率之间的差异有统计学意义（P＜0．05）；间接ELISA法试剂检测阴性符合率分别为94．3％（33／35）～100％（35／35），间接CLIA法试剂阴性符合率分别为94．3％（33／35）～97．1％（34／35），双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂阴性符合率均为97．1％（34／35），四种检测方法HCV抗体试剂阴性符合率之间的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论四种检测方法HCV抗体试剂的性能基本一致，不同方法各有优缺点，建议应用多种检测方法对弱阳性样本进行确认检测。
