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大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其诱导表达与抑制的研究
目的 了解浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其携带模式、β-内酰胺类抗生素诱导β-内酰胺酶基因表达及组氨酸激酶抑制剂氯氰碘柳胺(CLO)抑制其表达的作用.方法 采用微量稀释法和E-test检测大肠埃希菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素耐药率和低抑菌浓度(MIC).采用PCR及其产物测序法检测大肠埃希菌耐药菌株β-内酰胺酶基因型及携带模式.采用实时荧光定量RT-PCR和β-内酰胺酶确证试验分别检测1/4 MIC头孢噻肟或青霉素及CLO对大肠埃希菌耐药菌株β-内酰胺酶基因转录和表达的影响.结果 浙江地区61.7％(285/462)大肠埃希菌对青霉素、氨苄青霉素、头孢西丁、头孢噻肟和头孢他啶耐药.285株耐药菌株中,TEM和CTX-M基因检出率(83.2％和75.1％)显著高于KPC、SHV和OXA基因(1.4％～10.2％)(P＜0.01),两种以上β-内酰胺酶基因携带率(68.8％)显著高于单基因(31.2％)(P＜0.01),其中61.4％菌株携带TEM+ CTX-M基因(P＜0.01).除KPC基因外,1/4 MIC头孢噻肟和青霉素能诱导89株β-内酰胺酶单基因菌株TEM、CTX-M、SHV和OXA mRNA水平迅速升高(P＜0.01),但可被50～ 500 μg/ml CLO所抑制(P＜0.01).100 μg/ml CLO预处理后,82.8％ ～ 85.6％耐药菌株对上述抗生素敏感(P＜0.01),β-内酰胺酶检出率也从95.1％下降至16.1％ (P＜0.01).结论 TEM和CTX-M是浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型,并以TEM-1+CTX-M为优势携带模式.低浓度头孢噻肟和青霉素可经细菌二元信号系统上调β-内酰胺酶基因表达,但可被组氨酸激酶抑制剂CLO所抑制.
