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两对引物-聚合酶链反应技术文献资料
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代谢酶基因单核苷酸多态性两对引物-聚合酶链反应技术方法的建立及初步应用
目的 采用相对的两对引物-聚合酶链反应技术(PCR-CTPP),建立简单、准确、快速、经济、大规模检测代谢酶基因单核苷酸多态性(SNPs)的方法.方法 针对I相代谢酶CYP1A1(A4889G)和Ⅱ相代谢酶EPHX1(A416G)、NQO1(C609T)SNPs设计PCR-CTPP引物,优化PCR反应条件,将其基因分型结果与DNA测序结果进行比对,验证准确性.用该PCR-CTPP检测方法对随机选取的183名汉族健康人进行上述SNPs检测,并与其他健康人群进行比较.结果 通过条件优化,PCR-CTPP检测方法可快速清晰地区分CYP1A1(A4889G)、EPHX1(A416G)和NQ01(C609T)的基因型,并与DNA测序结果相符合.183名汉族健康人中,CYP1A1(A4889G):A纯合子103例(56.3%),G纯合子8例(4.4%),A/G杂合子72例(39.3%);EPHX1(A416G):A纯合子142例(77.6%),G纯合子4例(2.2%),A/G杂合子37例(20.2%);NQO1(C609T):C纯合子60例(32.8%),T纯合子32例(17.5%),C/T杂合子91例(49.7%).基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05),且存在种族差异(P＜0.05).结论 PCR-CTPP检测方法可简单、准确、快速、经济、大规模地检测代谢酶基因SNPs,可用于临床和流行病学大样本筛选.
