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皮内注射布氏杆菌活疫苗毒理学评价
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗拟取代目前我国人用皮上划痕布氏菌活疫苗.方法 对菌种进行了全面检定合格后,进行菌苗制备及实验室动物毒理、药效学方面的系列研究包括小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验、用细胞免疫诊断制剂布氏菌素对皮内免疫12周的豚鼠做背部皮肤变态反应试验.结果小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的大耐受量为10亿个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显迟发型变态反应.局部刺激试验只有注射10亿菌的部位会在48h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验,皮内免疫布氏菌疫苗组及阴性对照组对豚鼠进行攻击后,均未出现任何异常反应,而阳性对照组豚鼠全部死亡.毒性试验,布氏活疫苗皮内免疫组与盐水对照组经6周和12周后各项血常规、血生化检查均未见异常,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变,免疫12周后对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响,对皮内免疫12周的豚鼠做背部皮肤变态反应试验,24～48h结果 为阳性.结论 动物实验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.
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皮内注射用布氏菌活疫苗的免疫学评价
目的 探讨布氏菌活疫苗皮内注射小鼠产生的体液免疫、细胞免疫应答及免疫保护力.方法 将30只小鼠随机分为3组,每组10只,分别为低剂量组(5×107个/只)、高剂量组(2× 108个/只)和生理盐水对照组,3组均经后肢皮内注射布氏菌活疫苗,0.1ml/只.免疫4周后,摘眼球取血,分离血清,制备脾脏淋巴细胞,ELISA法检测小鼠血清中抗Br-PPD IgG抗体效价;ELISPOT法检测分泌IFNγ、IL-4的脾脏淋巴细胞数;ELISA法检测体外再刺激后小鼠脾脏淋巴细胞分泌的IFNγ水平;流式细胞术对T细胞亚群进行分类.用羊布氏菌M5弱毒株攻击免疫小鼠,通过脾脏荷菌量评价布氏菌活疫苗的免疫保护作用.结果 低、高剂量组小鼠血清中抗Br-PPD IgG抗体效价均较高,几何平均滴度分别为642和557;低、高剂量组小鼠在Br-PPD抗原刺激下,分泌IFNγ、IL-4的脾脏淋巴细胞数以及脾脏淋巴细胞分泌的IFNγ含量,与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05);CD4+ IFNγ+、CD4+ IL-4+比例均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05);低、高剂量组小鼠脾脏荷菌量为0,对照组小鼠为(5.13±0.16) log10 CFU.结论 采用皮内注射布氏菌活疫苗的方式免疫小鼠后,能获得较强的体液免疫、细胞免疫应答及免疫保护力.
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羊口蹄疫灭活疫苗分别与小反刍兽疫活疫苗及布氏菌活疫苗联合使用的免疫效果分析
目的 分析羊口蹄疫灭活疫苗(inactivated food and mouth disease vaccine,IFMDV)分别与小反刍兽疫活疫苗(live attenuated peste des petits ruminants vaccine,LPPRV)及布氏菌活疫苗(live Brucella vaccine,LBV)联合使用的免疫效果.方法 应用口蹄疫O型、亚洲1型二价灭活疫苗与LPPRV联合免疫山羊,观察山羊不良反应,采用病毒中和试验法和液相阻断ELISA法分别测定山羊血清中小反刍兽疫抗体及口蹄疫抗体水平.应用口蹄疫O型、A型、亚洲1型三价灭活疫苗与LBV(M5株)联合免疫绵羊,观察绵羊的不良反应,采用试管凝集试验及液相阻断ELISA法检测绵羊血清中布氏菌抗体及口蹄疫抗体水平.结果 IFMDV分别与LPPRV及LBV联合免疫山羊及绵羊,均未见明显的不良反应,仅出现一过性体温升高现象;IFMDV(肌肉)和LPPRV(皮下)同时联合免疫,山羊血清中小反刍兽疫抗体水平明显高于单独免疫LPPRV组(P＜0.05);IFMDV与LBV联合免疫,绵羊血清中布氏菌抗体水平高于单独免疫LBV组(P＜0.05),且联合免疫组抗体阳性率达100％,比单独免疫LBV组提高了13％.结论 IFMDV分别与LPPRV、LBV联合使用具有良好的安全性,且可提高LPPRV及LBV的免疫效果.
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布氏菌活疫苗滴鼻免疫小鼠的免疫学评价
目的 评价布氏菌活疫苗滴鼻免疫小鼠后黏膜、体液及细胞免疫的效果.方法 将60只小鼠随机分为低剂量组(5×107个/只)、高剂量组(3×108个/只)和阴性对照组(生理盐水),均于小鼠清醒状态下进行滴鼻免疫布氏菌活疫苗,剂量为10μl/只(5μl/鼻孔).免疫30 d后,分离血清,制备脾脏淋巴细胞及肺泡灌洗液.间接ELISA法检测免疫小鼠血清中IgG抗体效价、肺泡灌洗液中IgG、IgA抗体效价及体外再刺激后小鼠脾细胞分泌IFNγ、IL-4水平;ELISPOT法检测分泌IFNγ、IL-4的脾脏淋巴细胞数目;流式细胞术检测T细胞亚群分类.用羊布氏菌弱毒株M5经皮下和滴鼻两种途径攻击免疫小鼠,通过脾脏细菌计数评价布氏菌活疫苗的免疫保护作用.结果 低剂量组和高剂量组小鼠血清中IgG抗体效价及小鼠肺泡灌洗液中的IgG、IgA差异无统计学意义(P＞0.05);低剂量组和高剂量组小鼠在Br-PPD抗原和灭活菌体抗原刺激下,分泌IFNγ的脾脏淋巴细胞数、体外再刺激后小鼠脾细胞分泌IFNγ的水平及脾淋巴细胞中CD4+ IFNγ+细胞比例均明显高于阴性对照组(P＜0.05);攻毒试验结果表明,布氏菌活疫苗具有良好的保护力.结论 布氏菌活疫苗经滴鼻免疫小鼠后可获得良好的免疫效果和保护力.
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无明胶布氏菌活疫苗冻干稳定剂的筛选
目的：为皮上划痕人用布氏菌活疫苗筛选存活率高、无明胶冻干稳定剂。方法以冻干活菌存活率为指标，对甘油、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、谷氨酸钠、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和硫脲等10种稳定剂通过单因素筛选法，筛选出冻干存活率高的4种单因素稳定剂成分；将4种单因素稳定剂成分进行正交试验优化，筛选出优稳定剂组合。结果单因素试验结果显示，甘油、葡萄糖、谷氨酸钠和硫脲4种稳定剂成分冻干后活菌存活率较高，对布氏菌活疫苗具有良好保护效果。通过正交试验筛选出优稳定剂配方中四组分的质量分数分别为甘油1.5%、葡萄糖5%、硫脲1.5%、谷氨酸钠1.0%，该配方的冻干存活率可达81.5%。结论无明胶冻干稳定剂对布氏菌活疫苗具有较好的保护作用。
