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槲皮素通过促进大鼠肝细胞转硫化途径降低同型半胱氨酸水平的研究
目的 探讨槲皮素对大鼠肝细胞同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代谢的影响.方法 实验1:培养的大鼠肝细胞分成2组,对照组和5 μmol/L槲皮素组,分别用DMEM培养液和含有5 μmol/L槲皮素的DMEM培养液培养;实验2(治疗性模型):培养的细胞分成4组:对照组、5μmol/L槲皮素组、50 mmol/L蛋氨酸(methionine,Met)组和5μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met组,分别用空白DMEM培养液,含有5 μmol/L槲皮素、50 mmol/L Met以及5 μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met的DMEM培养液培养24 h,随后收集培养液检测Hcy;实验3(预防性模型):培养的细胞分成4组:对照组、5μmol/L槲皮素组、50 mmol/L Met组和5μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met组.在前23 h,5 μmol/L槲皮素组、5 μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met组用含有5μmol/L槲皮素的DMEM培养液处理,其余两组用空白培养液处理;在实验结束前的1h,所有组均换液,分别用空白培养液,含有5μmol/L槲皮素、50 mmol/LMet和5μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met的培养液处理细胞1h.实验结束,收集各组培养液和肝细胞,检测培养液Hcy水平,肝细胞内谷胱甘肽(GSH)含量以及胱硫醚-β合成酶(CBS)活性和表达.结果 在槲皮素处理组,槲皮素和甲基化槲皮素的含量分别为(36.74±0.05)μg/L和(31.57±0.03)μg/L.在实验2和实验3中,Met处理后Hcy水平显著增加,在实验3中槲皮素处理能够降低Hcy水平.实验3中槲皮素组及其槲皮素+Met处理组GSH含量增加,CBS活性显著增加.结论 在Met负载大鼠肝细胞,槲皮素能通过促进转硫化途径来降低Hcy水平.
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蛋氨酸负载对大鼠肝细胞Hcy代谢酶及相关代谢物的影响
目的 观察蛋氨酸(methionine,Met)负载对大鼠肝细胞同型半胱氨酸代谢酶及相关化合物的影响.方法 体外培养BRL (Baffalo rat liver)细胞,将其分为两组,对照组和Met组(20 mmol/L Met作用1h).采用高效液相色谱法检测同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)、S-腺苷蛋氨酸(SAM)、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量,全自动氨基酸分析仪检测培养液中丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、胱氨酸(Cys)、牛磺酸(Tau)的含量,参照文献方法检测细胞内S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)、胱硫醚-p-合成酶(CBS)、甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)和蛋氨酸合成酶(MS)的活性.结果 蛋氨酸负载后,培养液中Hcy、Cys、Ser和胱氨酸含量显著增加(P＜0.05),而Glu、Gly和Tau含量显著减少(P＜0.05);细胞内SAM含量显著增加(P＜0.05),SAHH活性显著增强(P＜0.05),BHMT和MS活性显著减弱(P＜0.05).SAH含量和CBS活性变化不明显.结论 蛋氨酸负载可活化大鼠肝细胞中同型半胱氨酸的转硫化途径,同时抑制其再甲基化途径.[营养学报,2013,35 (6):545-548]
