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改进中和剂鉴定试验方法的研究
目的 改进中和剂鉴定试验方法,以解决消毒剂标示使用浓度过高而造成判定困难的问题.方法 采用悬液定量杀菌试验程序鉴定中和剂效果的方法,对改进后中和剂鉴定试验方法的效果进行了观察.结果 按照产品标示浓度进行中和剂鉴定试验,第1、2组无菌生长,按照2002年版<消毒技术规范>规定,判定设计的中和剂对二氧化氯和碘伏消毒剂中和效果不合格.通过降低产品标示浓度和调整作用时间,按原程序进行中和剂鉴定试验,结果所有实验组生长菌数全部符合设计要求,判定中和剂有效.结论 消毒产品标示浓度过高,需要对其试验浓度进行适当降低,以低有效杀菌浓度进行中和剂鉴定试验,应更符合试验实际要求.
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消毒剂杀菌效果试验中中和剂同步稀释效果鉴定方法
目的 研究高浓度消毒剂杀菌效果评价中和剂中和效果鉴定难题.方法 通过同时降低中和剂和消毒剂试验浓度,按悬液定量方法进行鉴定试验.结果 鉴定试验结果表明,含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧乙酸等3类9种消毒剂在有效成分含量为500 mg/L且中和剂为原液条件下进行试验,第1、2组均无菌生长,但其他组生长菌数正常.将各消毒剂与中和剂均降低10倍浓度进行中和剂鉴定试验,结果第1、2组生长菌数符合《消毒技术规范》的要求,第3、4、5组菌落误差在允许范围内,可判定中和剂鉴定试验结果符合要求.结论 对有效杀菌浓度标示过高的消毒剂,在进行中和剂鉴定试验中,可采用同时降低消毒剂和中和剂浓度的方法进行试验,只要中和剂本身有效,可以避免第1、2组无菌生长的问题.
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高浓度氯已定类消毒剂的中和剂筛选研究
目的 观察三种中和剂对高浓度氯已定类消毒剂的中和作用,以筛选出可有效中和高浓度氯已定类消毒剂的中和剂配方.方法 分别采用载体定量与悬液定量鉴定试验,对三种不同配方的中和剂中和高浓度氯已定类消毒剂效果进行评价.结果 在载体定量鉴定试验中,使用中和剂A不能有效中和10 g/L葡萄糖氯已定醇对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的残留作用.在相同条件下,使用中和剂B和中和剂C均可以有效中和该葡萄糖氯已定醇溶液对试验菌的残留作用.在悬液定量鉴定试验中,使用中和剂A亦不能中和含量10g/L葡萄糖酸氯己定醇对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的残留作用.使用中和剂B只能中和该葡萄糖酸氯己定醇对白色念珠菌的残留作用,使用中和剂C均可中和10 g/L葡萄糖氯已定醇溶液对两种试验菌的残留作用.结论 中和剂A和B作为常规氯己定中和剂不能有效中和葡萄糖酸氯己定醇,而中和剂C则可用于高浓度葡萄糖氯已定醇溶液杀菌试验.
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中和剂鉴定试验方法评价
为解决中和剂鉴定试验中消毒剂使用浓度过高而造成判定困难的问题,通过对试验作用时间的控制,进行了中和效果的观察.结果,经过缩短第4组消毒剂与中和剂作用时间后即与细菌作用,只要细菌生长正常即可证明中和作用迅速且有效.改进后结果证明,以试验中和剂中和含有效碘5000 mg/L的碘伏消毒剂和含有效氯1250 mg/L的84消毒液,第4组细菌生长正常,菌数与第3、第5组误差在允许范围内.结论,改进的中和剂鉴定试验结果符合设计要求.
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肠道病毒71型多克隆抗体F(ab')2片段的制备及其体外中和效果评价
目的 制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)多克隆抗体F(ab’)2片段,并评价其体外中和效果.方法 采用硫酸铵分级沉淀法从EV71感染的兔血清中提取IgG,用胃蛋白酶进行酶解,正交试验确定佳酶解条件;使用阴离子交换层析(Q Sepharose Fast Flow)纯化得到F(ab’)2片段,采用体外中和试验检测其对EV71的中和效果.结果 硫酸铵分级沉淀法得到电泳纯的IgG;佳酶解条件为:胃蛋白酶与IgG按1:10的质量比混合,47℃反应4h,在此条件下,F(ab’)2的产率大值为79.51％,且方差分析表明,酶切比例对F(ab’)2产率的影响大,温度次之,时间对F(ab’)2产率的影响不明显;经阴离子交换层析纯化,可有效去除Fc片段,得到电泳纯的F(ab’)2;F(ab’)2具有与IgG、正常血清同等的中和效果.结论 成功制备了EV71兔多克隆抗体F(ab’)2片段,初步确定该F(ab’)2片段具有良好的体外中和效果.
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3种中和剂对常用消毒剂在Vero细胞上的中和效果
目的 研究0.5％硫代硫酸钠、10％胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)培养基、10％ Letheen肉汤培养基对实验室常用的4种消毒剂的中和效果,为疫苗生产和检定中科学选择中和剂提供依据.方法 取生长良好的Vero细胞接种于96孔培养板,每组8个复孔,置于37℃、5％ CO2培养箱培养过夜.将3种中和剂分别与杀孢子剂、0.5％“84”消毒液、酸性苯酚盐、碱性苯酚盐4种消毒剂中和后,接种于单层生长的Vero细胞,显微镜下观察细胞生长情况.结果 0.5％硫代硫酸钠分别与杀孢子剂、0.5％“84”消毒液中和后接种细胞,8孔细胞全部存活;而0.5％硫代硫酸钠分别与酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的中和产物接种细胞后,细胞全部死亡.10％ TSB培养基分别与酸性苯酚盐、碱性苯酚盐中和后接种细胞,8孔细胞全部存活;而10％ TSB培养基分别与杀孢子剂和0.5％“84”消毒液的中和产物接种细胞后,细胞全部死亡.10％ Letheen肉汤培养基接种细胞后,8个孔细胞全部死亡.结论 0.5％硫代硫酸钠可中和杀孢子剂和0.5％“84”消毒液的消毒作用,10％ TSB培养基可中和酸性苯酚盐和碱性苯酚盐的消毒作用.10％ Letheen肉汤培养对Vero细胞有毒性作用.
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中和剂鉴定试验方法探讨
在中和剂鉴定试验中,经常会出现因杀菌试验浓度过高,造成在杀菌试验用消毒剂浓度中和剂鉴定试验中第2组无菌生长的现象.为了解决这一问题,在实验室我们通过对3种含有效氯500 mg/L消毒剂降低试验浓度的方法进行中和剂鉴定试验.现将结果报告如下.
