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荧光免疫层析法快速测定牛奶中头孢氨苄残留量
目的 采用荧光免疫层析法结合现场检测仪建立牛奶中头孢氨苄残留的快速定量检测方法.方法 利用反向微乳技术合成稀土铕荧光纳米颗粒,与头孢氨苄单克隆抗体结合制备荧光检测探针,以头孢氨苄卵清蛋白全抗原和羊抗小鼠抗体分别作为检测线和质控线制备免疫层析试纸条,结合现场检测仪建立牛奶中头孢氨苄残留的快速定量检测方法.结果 试验结果表明,该方法对头孢氨苄的检测限为0.16 ng/ml,半数抑制浓度(IC50)为0.6 ng/ml,线性范围为0.16 ～5 ng/ml,标准添加回收率为100％～115％之间,与头孢菌素类及青霉素等其他12种抗生素的交叉反应率均＜0.01％,与ELISA方法比较,测定结果相关性良好.结论 本试验所建立的荧光免疫层析法快速检测牛奶中头孢氨苄残留,具有简便、快速、灵敏、直观的优点,可用于抗生素残留的筛查,极具推广和应用价值.
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蓖麻毒素单抗制备及上转发光免疫层析定量检测方法研究
目的：建立一种可快速、精确地对蓖麻毒素（ RT）进行定量检测的上转发光免疫检测技术（ UPT-LF），即RT-UPT-LF。方法采用杂交瘤细胞技术制备蓖麻毒素单克隆抗体并对效价进行评价；采用效价高的4种单抗分别与上转发光纳米颗粒（ UCP-NP）共价偶联，分别作为检测带，进而两两配伍，确定优的配伍组合条件建立RT-UPT-LF方法；对RT-UPT-LF的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果与结论所建立的RT-UPT-LF方法可在15 min内完成对蓖麻毒素的检测，灵敏度可达0．5 ng／ml，定量范围为0．5～1000 ng／ml，与其他高浓度毒素无非特异反应，该法为蓖麻毒素检测提供了一种新手段。
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快速定量检测CA72-4的超顺磁性免疫层析试纸条的研制
目的：建立一种简单、实用的磁性免疫层析试纸条来检测人血清中糖链抗原72-4（CA72-4）水平。方法：采用水热合成法制备羧基化水溶性纳米磁珠，利用EDC／NHS偶联技术制备纳米磁珠探针，优化并组装试纸条，对其灵敏度、特异度及稳定性进行测试及评价。结果：构建的试纸条不仅能提供定性的检测结果，还可以通过稳定的磁信号进行高灵敏度的定量分析，定量检测限值为0．83 IU／mL。检测100例临床血清样本，结果与电化学发光法一致性较高，其灵敏度为99％，特异度为93％，差异具有统计学意义。试纸条及磁信号强度稳定性良好。结论：初步实现了利用免疫层析试纸条快速定量检测CA72-4，且检测灵敏度高、特异性好，试纸条及磁信号强度稳定性良好。检测过程简单、快速，适合大样本的初筛或者作为胃癌患者进行病情监测的自检测手段。
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贝伐珠单克隆抗体的HPLC定量检测方法的建立
目的:建立HPLC-Protein A定量检测贝伐珠单抗的方法,用于该单抗生产过程的含量测定和质量控制.方法:采用Agilent Bio-Monolith Protein A Column(5.2 mm ×4.95 mm,0.10 mL)色谱柱,以PBS(含0.12 mol·L-氯化钠,pH 7.4)为流动相A,0.5 mol·L-1醋酸(pH 2.5)为流动相B.上样后用流动相A冲平,然后用流动相B进行洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为280 nm.结果:以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,在0.078 ～ 10.0 mg·mL-1浓度范围内,R2 ＞0.999;回收率在98.32％ ～ 101.7％之间;批内精密度RSD≤1.5％;批间精密度RSD≤1.6％;检测限0.30 μg,定量限0.90 μg;在pH变化±0.2、流动相A中氯化钠浓度变化±10.0％、柱温变化±5.0℃、流速变化±20.0％条件下,峰面积相对标准差RSD为0.39％ ～ 1.0％;发酵液样品的保留时间为1.350 min,与对照品的保留时间一致;在18h内,同一批发酵液共检测27次,峰面积的RSD为0.44％.结论:方法学验证结果显示HPLC-Protein A法可以用于贝伐珠单抗生产过程的含量测定和质量控制.
