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中国林蛙(Rana chensinensis)蛙皮抗菌肽的制备及抗菌作用研究
目的 从中国林蛙的皮肤中,提取纯化具有抗菌活性的多肽物质,并对其进行抑菌活性的研究. 方法 用甲醇进行粗提取.对提取的甲醇浓度、甲醇用量、浸提时间和浸提次数,采用L9(34)正交实验,以蛋白含量作为指标,确定佳提取条件.得到的粗提物经Sephadex G-75、Sephadex G-50和Sephadex G-25凝胶过滤进一步分离纯化获得抗菌肽.对抗菌肽进行氨基酸组成分析,采用杯磲法进行抑菌活性研究. 结果 提取林蛙抗菌肽的佳工艺条件:甲醇浓度80%、甲醇体积为蛙皮重量的6倍、提取时间24 h,提取次数3次.提取的粗提物经凝胶过滤后得到抗菌肽.抗菌肽的氨基酸组成中,碱性氨基酸占22.1%,酸性氨基酸占13.9%.抗菌肽对细菌的低抑菌浓度分别为:枯草杆菌73.25μg/ml,金黄色葡萄球菌51.75 μg,/ml,大肠杆菌51.75μg/ml,铜绿假单胞菌51.75μg/ml. 结论 经甲醇提取和凝胶过滤可从中国林蛙皮肤得到抗菌肽,该抗菌肽为碱性多肽,对革兰阳性细菌、革兰阴性细菌均有抑制作用.
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林蛙皮甲醇提取物对小鼠无水乙醇型胃溃疡的保护作用
[目的]观察林蛙皮甲醇提取物对无水乙醇型小鼠胃溃疡的影响,并探讨其机制.[方法]取昆明种小鼠随机分为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(0.22 g/kg西咪替丁)和林蛙皮甲醇提取物小、中、大剂量组(0.22,0.45,0.90 g/kg).连续给药7d,末次给药Ih后灌胃给予0.01 mL/g无水乙醇制作胃溃疡模型,30 min后取胃,测定溃疡指数.应用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲醋(L-NAME)观察林蛙皮甲醇提取物的作用机制.[结果]与模型对照组比较,林蛙皮甲醇提取物小、中、大剂量组小鼠溃疡指数均降低,其中高剂量组的溃疡指数显著降低(P<0.01),给予L-NAME后林蛙皮甲醇提取物对小鼠胃溃疡的保护作用受到抑制(P<0.01).[结论]林蛙皮甲醇提取物对小鼠无水乙醇型胃溃疡有保护作用,其机制可能与诱导一氧化氮生成有关.
