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树突状表皮T淋巴细胞在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及机制
目的 探讨树突状表皮T淋巴细胞(DETC)在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及其相关机制. 方法 (1)取1只野生型C57B L/6雄性小鼠背部全层皮肤,分离表皮细胞,流式细胞仪检测DETC表达情况及细胞表型.另取1只野生型C57BL/6雄性小鼠背部全层皮肤,分离表皮,免疫荧光技术观察DETC形态学特征.(2)分别取4只绿色荧光蛋白(GFP)标记C57BL/6雄性小鼠、7只野生型C57BL/6雌性小鼠(野生型组)以及7只γδT淋巴细胞δ基因敲除C57B L/6雌性小鼠(基因敲除组).剪去野生型组与基因敲除组小鼠背部1.4 cm×1.4 cm大小全层皮肤,移植GFP标记C57BL/6雄性小鼠背部1.2 cm×1.2 cm大小全层皮肤,通过小动物活体成像仪及肉眼观察,判定并记录移植皮片存活时间.(3)取2只野生型C57B L/6雄性小鼠,分离表皮细胞,加入48孔板,按随机数字表法分为激活组和对照组,每组4孔.激活组加入2 μg/mL刀豆蛋白A 10 μL,对照组加入等量PBS,处理24 h后用流式细胞仪检测DETC表达γ干扰素情况.(4)取4只GFP标记C57BL/6雄性小鼠(供体);取14只野生型C57 BL/6雌性小鼠(受体),按随机数字表法分为γ干扰素中和组和对照组,每组7只.按(2)中方法构建皮肤移植模型,术前和术后72 h,γ干扰素中和组小鼠腹腔注射1 mg/mLγ干扰素中和抗体200 μL,对照组注射等量生理盐水,同(2)中方法观察并记录移植皮片存活时间,并将γ干扰素中和组与(2)中基因敲除组移植皮片存活时间进行比较.对皮片生存曲线进行Log-rank(Mantel-Cox)检验. 结果 (1)小鼠皮肤表皮细胞内DETC阳性表达率为7.27％,且DETC均为CD3+表型细胞.DETC呈树突状散在分布于小鼠皮肤表皮中.(2)基因敲除组小鼠移植皮片存活时间为22 ～ 35 d,较野生型组的12 ～ 16 d明显延长(x2=14.10,P＜0.001).(3)激活组DETC的γ干扰素表达率为22.70％,明显高于对照组的0.51％.(4)γ干扰素中和组小鼠移植皮片存活时间为19 ～24 d,较对照组的12～16 d明显延长(x2=13.60,P＜0.001),但与(2)中基因敲除组小鼠移植皮片存活时间相近(x 2 =0.06,P=0.810). 结论 DETC在C57BL/6小鼠皮肤移植免疫排斥反应中起促进作用,该作用可能是通过其分泌γ干扰索实现的.
关键词： 皮肤移植 干扰素γ 移植免疫学 树突状表皮T淋巴细胞 -
树突状表皮T淋巴细胞生物学特征及病理生理效应研究进展
The maturation of dendritic epidermal T lymphocytes (DETCs) in thymus needs ligand-mediated positive selection, and positive selection together with V3γ + γδT lymphocytes intrinsic program features order DETCs to specifically migrate to epidermis.Positive selection promotes DETCs to express CD122, which is vital for DETCs to survive and proliferate in skin.DETCs possess memory-like phenotype and are able to rapidly respond to danger signals when they move out from thymus.NKG2D, junctional adhesion molecule-like protein and 2B4 are demonstrated to participate in DETCs activation, except for ligands of T lymphocytes receptor.Effective DETCs secrete cytokines such as interferon-γ, insulin-like growth factor-2, keratinocyte growth factor and gain cytotoxicity to directly kill tumor cells.DETCs participate in skin immune surveillance, regulation of local inflammation, and wound healing promotion.
关键词： 生物学 细胞运动 病理过程 树突状表皮T淋巴细胞
