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缺氧人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达变化及其与屏障功能的关系
目的 研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系. 方法 建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型.取细胞按照随机数字表法分为6部分,分别行缺氧处理0h(即刻)及1、2、6、12、24 h,采用生物电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻(TER).另取细胞同前行缺氧处理,采用蛋白质印迹法检测带状闭合蛋白1(ZO-1)、咬合蛋白、闭合蛋白1及Slingshot-1、Slingshot-2、Slingshot-3的蛋白表达.另取细胞同前行缺氧处理,采用荧光法检测纤维状肌动蛋白及球状肌动蛋白含量.3项检测中,各时相点样本数分别为10、10、18.对数据行单因素方差分析、Dunnett检验. 结果 (1)与缺氧0h比较,缺氧1～24 h细胞的TER值均明显降低(P值均小于0.01).(2)与缺氧0h(均为1.00)比较,缺氧1～24 h细胞的ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1表达量普遍降低,于缺氧12h或24 h达到低值(分别为0.69±0.20、0.47±0.15、0.47 ±0.22,P ＜0.05或P＜0.01).与缺氧0h比较,缺氧1～24 h细胞的Slingshot-1、Slingshot-3蛋白表达量无明显变化(P值均大于0.05);缺氧1～24 h,细胞的Slingshot-2蛋白表达量呈先降低后上升的趋势,其中缺氧24 h(1.54±0.57)明显高于缺氧0 h(1.00,P＜0.05).(3)与缺氧0h比较,缺氧1、6、12、24 h细胞的纤维状肌动蛋白含量明显减少,缺氧6～24 h细胞的球状肌动蛋白含量明显增加,P＜0.05或P＜0.01;其余时相点2项指标无明显变化(P值均大于0.05). 结论 缺氧通过诱导人肠上皮细胞Slingshot-2表达,引起丝切蛋白去磷酸化而活化以及纤维状肌动蛋白解聚,从而影响细胞间紧密连接,导致细胞屏障功能受损.
