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MIF基因、CCL5基因及其受体CCR5基因多态性与肺结核易感相关性研究
目的:探讨MIF基因、CCL5基因及其受体CCR5基因多态性与青海地区不同人群肺结核易感性相关性.方法:病例组95例选择我院临床诊断和确诊的肺结核患者,对照组80例选择来我院健康体检人群,探讨MIF基因、CCL5基因及其受体CCR5基因多态性与青海地区不同区域不同人群肺结核易感性之间关系.结果:MIF基因、CCL5基因SNP位点的等位基因以及基因型在病例组和对照组分布差异均无统计学意义(P>0.05).病例组CCL5-rs22800788的基因频率在和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:CCL5-rs22800788的基因频率在病例组与对照组比较有差异,与青海地区结核病易感性可能存在相关性.
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电针对吗啡戒断大鼠不同脑区FosB基因表达的影响
目的:观察电针对吗啡戒断大鼠戒断症状及不同脑区内FosB基因表达的影响.方法:采用逐日增量背部皮下注射盐酸吗啡注射液,末次注射后3 h给予纳洛酮快速戒断建立吗啡戒断大鼠模型,随后治疗组采用电针穴位干预.戒断后1、3、7d,分别采用戒断症状评分表评定各组大鼠戒断症状,应用RT-PCR测定大鼠前额叶皮质、伏隔核内FosB基因的表达水平.结果:戒断后各组症状评分显示:与空白组比较,戒断后1、3、7d模型组与电针组评分均明显升高(P<0.01),而随戒断时间增加模型与电针组评分均逐渐下降;与模型组比较,戒断后1、3、7d电针组戒断评分均明显降低(P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明:戒断后1、3、7d电针组大鼠伏隔核FosB mRNA表达较模型组显著下降(P<0.01),且呈先快后慢的趋势;前额叶皮质内FosB mRNA表达较模型组下降(P<0.05),但呈先慢后快的趋势.结论:电针可以逐渐改善吗啡戒断后大鼠戒断症状,同时下调不同脑区内FosB mRNA的表达,且其表达变化规律在奖赏环路不同脑区内存在差异.
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siRNA靶向抑制MACC1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:采用小干扰RNA(siRNA)靶向抑制结直肠癌细胞中MACC1的表达,观察其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:Real time-PCR检测MACC1在结直肠癌组织和细胞株中的表达水平;利用Lipofectmin2000将MACC1特异性siRNA转染进入结直肠癌细胞株LoVo和SW620;利用Real time-PCR和Western blot法明确细胞中MACC1在mRNA和蛋白水平上的表达变化;通过CCK-8法检测肿瘤细胞增殖水平的变化,并利用Transwell系统检测肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力的变化.结果:MACC1在结直肠癌中表达较正常肠黏膜显著升高;与阴性对照比较,MACC1 siRNA能够特异性抑制LoVo和SW620细胞中MACC1基因的表达,并引起肿瘤细胞的增殖水平降低,迁移和侵袭能力减弱.结论:利用siRNA特异性抑制MACC1的表达,可以降低结直肠癌细胞的增殖水平和侵袭能力.MACC1是抗肿瘤转移治疗的重要潜在靶点.
关键词： 结直肠肿瘤/病理生理学 基因/代谢 肿瘤转移 MACC1 -
低氧浓度改变对神经干细胞增殖分化及HIF-1α表达的影响
目的:探讨不同的低氧浓度下离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的增殖分化及HIF-1α的表达情况,以此分析HIF-1α对神经干细胞的增殖分化作用.方法:体外低氧条件下(3%O2和10%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的神经干细胞,实验组分为3%O2低氧1、3、5d组;10%O2低氧1、3、5d组,常氧为对照组.免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞.RT-PCR检测实验组细胞HIF-1αmRNA的表达.结果:各低氧组NSCs内HIF-1αmRNA的表达量均明显高于对照组,且10% O2组与3% O2组相比,低氧5d HIF-1αmRNA 的表达量显著增加;实验组NSE阳性神经元的比率均明显高于对照组,10% O2组与3% O2组相比,低氧5d 10% O2组中NSE阳性神经元的比率明显增高.结论:低氧可促进NSCs增殖分化及HIF-1αmRNA的表达,且HIF-1αmRNA的表达量与低氧浓度及时间有关.
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体外培养过程中软骨细胞凋亡与Caspase-3基因表达的关系
目的:探讨软骨细胞在体外培养过程中或药物诱导下细胞凋亡与细胞表达Caspase-3之间的关系,TNF-α和Cycloheximide (CHX)诱导凋亡的软骨细胞,检测Caspase-3基因表达及细胞凋亡,为阻断细胞凋亡寻找理想的作用靶点；为增加软骨组织工程种子细胞的产量提供理论依据和新策略；为临床耳廓成型及修复提供新的材料来源.方法:①胎儿软骨细胞常规分离培养；不同浓度TNF-α+CHX组合诱导软骨细胞凋亡.②MTT法测定细胞生长曲线；TUNEL法和DNA片段化检测细胞凋亡.③所得数据用SPSS软件包分析.结果:①经不同浓度的TNF-α+CHX诱导体外培养的软骨细胞,流式细胞术和TUNEL法检测出细胞凋亡,凋亡指数在18.4％～67.9％之间.②TUNEL法和比色法检测分别显示诱导后凋亡发生时,不同代次软骨细胞Caspase-3基因表达和蛋白表达均比对照组有显著上升.结论:体外培养软骨细胞通过诱导凋亡,观察到凋亡发生时,Caspase-3基因和蛋白表达均出现显著上升.为体外规模培养工程细胞提供了阻滞凋亡的分子靶点.
关键词： 软骨细胞 细胞凋亡 基因/代谢 体外研究 @Caspase-3 -
小鼠骨髓干细胞移植对生殖细胞生成的影响
目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓干细胞移植对不育模型小鼠生殖细胞的影响.方法:用白消安造小鼠无精子症模型,将绿色荧光转基因小鼠骨髓细胞处理后移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,在小鼠分组干预后用Western- Blot方法检测各组小鼠睾丸VASA基因表达水平.结果:模型鼠睾丸病理切片显示睾丸曲细精管内生殖细胞显著减少(P＜0.05),Western- Blot结果显示VASA基因蛋白水平较正常鼠显著降低(P＜0.05)移植成功组小鼠VASA基因蛋白表达水平较模型对照组高(P<0.05),但仍低于正常鼠水平.结论:①含骨髓干细胞的骨髓混合细胞移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,可明显促进生殖细胞生成.②VASA基因表达水平可作为睾丸性不育动物模型评价指标.
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氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax的影响
目的:研究氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax蛋白及大脑梗死体积的影响.方法:昆明纯种小白鼠共30只,随机分为4组,S组(n=7)为假手术组,C组(n=8)为缺血再灌注损伤对照组,I组(n=8)为线栓缺血梗死后氯胺酮治疗组,R组(n=7)为线栓缺血梗死再灌注后氯胺酮治疗组.结果:C组海马Bax蛋白表达明显高于其他3组(P<0.05),C组海马Bcl-2蛋白表达低于I组和R组(P<0.05).C组脑梗死体积明显高于I组和R(P<0.05)组.C组、I组、R组的神经功能缺失体征评分无显著性差异(P＞0.05).结论:氯胺酮可降低缺血再灌注脑损伤小鼠海马凋亡基因Bax的蛋白表达和大脑梗死体积,提高抑制凋亡基因Bcl-2的蛋白表达.
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三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D1基因表达的影响
目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞Cyclin D1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制.方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/L LaCl3,培养3、5、7 d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测Cyclin D1的基因表达.结果:0.1、1.0mmol/L LaCl3组培养3、5 、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加; Cyclin D1的转录和蛋白表达均显著减弱.结论:LaCl3可通过下调Cyclin D1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长.
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大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究
目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用.方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达.结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37).癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01).MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态.癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05).结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加.结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关.
