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微载体规模化培养细胞的研究
通过实验探索使用微载体进行动物细胞规模化培养,以期达到建立规模化生产病毒疫苗的目的.实验研究了Vero细胞的生长曲线,以及对细胞生长过程中影响细胞生长的葡萄糖、氨含量两个主要因素的变化规律以及微载体浓度与细胞密度的关系.通过实验发现微载体规模化培养细胞易于操作,比传统转瓶培养的细胞密度高,封闭式的培养方式不但减少了污染几率,而且可以充分保证疫苗的质量.终找出适宜疫苗培养的微载体使用浓度为2.5g/L,适宜的细胞接种浓度为: 1～5×105cell/ml.
关键词： 微载体 Cytodex-III 细胞培养 Vero细胞 -
软骨细胞三维培养扩增与液态凝胶复合构建软骨的实验研究
目的 通过在微载体上进行三维培养扩增软骨细胞,并结合液态胶原构建组织工程软骨.方法 比较兔软骨细胞在单层培养与微载体上进行三维培养扩增软骨细胞的保持表型能力.幼兔软骨细胞分别进行单层和微载体三维培养扩增.并进行体外球型培养评价软骨细胞保持表型能力和糖胺多糖的定量生化分析.三维培养扩增软骨细胞与液态鼠尾胶原复合构建组织工程软骨,分别以低细胞密度(2×106个/mL)和高细胞密度(1.2×107个/mL)两种细胞密度接种,培养14 d后通过组织学特种染色鉴定构建组织特性.结果 微载体培养的软骨细胞可以保持良好活力和保持表型能力,与单层培养体系相比较.细胞糖胺多糖的定量生化分析的差异具有统计学意义(P<0.05).三维培养扩增软骨细胞复合液态鼠尾胶原构建组织上程软骨,体外14 d后发现高细胞密度接种时可形成形态稳定的软骨组织.组织学染色显示为透明软骨样组织.结论 在微载体上进行三维培养扩增软骨细胞可以加强细胞保持表型能力.软骨细胞与液念胶原合成后.以高细胞密度(1.2×10'个/mL)可以在体外形成形态稳定的组织工程软骨.
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成人退变椎间盘细胞微载体培养的形态学观察
①目的建立成人退变椎间盘细胞的体外三维培养模型,并观察其形态学变化.②方法对8例取自椎间盘疾病病人退变椎间盘的手术标本,采用系列酶消化法对其进行了体外细胞培养,并将细胞转移至微载体旋转培养系统中进行培养,利用倒置相差显微镜进行形态学研究,并对细胞涂片进行染色观察.③结果退变椎间盘细胞在三维微载体旋转培养系统中可以获得良好的生长并大量的增生,培养的细胞具有退变的特性.④结论成人退变椎间盘细胞体外立体培养成功,退变细胞能够快速大量增殖,为成功体外构建组织工程学椎间盘奠定了基础.
