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竞争逆转录聚合酶链反应文献资料
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粒酶B和穿孔素mRNA竞争模板的构建
目的: 为测定肾移植术后患者尿中粒酶B和穿孔素mRNA水平构建其相应的竞争模板. 方法: 取肾移植术后患者尿样,通过RT-PCR反应,获得含特定酶切位点的粒酶B和穿孔素片段,酶切粒酶B和穿孔素片段,分别在其间插入44 bp和36 bp外源性DNA片段,连接入PGEM4载体. 结果: 经酶切鉴定及DNA测序证实,外源性DNA正确插入粒酶B及穿孔素片段,竞争模板引物结合区域与靶序列一致,所构建粒酶B竞争模板与粒酶B片段相差29 bp,所构建粒酶B竞争模板与粒酶B片段相差36 bp. 所构建新载体适合作为定量PCR的竞争模板. 结论: 基因重组方法可成功构建用于定量PCR的竞争模板,方法简便可行.
关键词： 穿孔素 颗粒酶B 竞争逆转录聚合酶链反应 RNA 信使
