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金黄色葡萄球菌肽聚糖对破骨细胞分化的影响研究
目的 探讨金黄色葡萄球菌肽聚糖(Staphylococcal peptidoglycan,PGN-sa)对raw264.7细胞向破骨细胞分化的影响.方法 取raw264.7细胞分为5组,分别为100 ng/mL PGN-sa组、200 ng/mL PGN-sa组、400 ng/mLPGN-sa组、阳性对照组[100 ng/mL NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)]以及空白对照组(PBS),按照分组以不同浓度PGN-sa、RANKL或PBS进行培养.于第5天行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,观察破骨样细胞的形成情况并行细胞计数;Image-Pro Plus 6.0软件测量骨吸收凹陷面积;MTT法检测细胞增殖活性.结果 TRAP染色显示,除空白对照组外,各浓度PGN-sa组及阳性对照组均有破骨样细胞形成,各浓度PGN-sa组破骨样细胞数均多于空白对照组(P＜0.05);且破骨样细胞数目随PGN-sa浓度增加而增多,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).骨吸收凹陷检测示,各浓度PGN-sa组均见骨吸收凹陷形成,骨吸收凹陷面积比值与阳性对照组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);且骨吸收凹陷面积比值随PGN-sa浓度增加逐渐增大,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).MTT检测显示,各浓度PGN-sa组吸光度(A)值与空白对照组比较以及各浓度PGN-sa组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PGN-sa能促进具有骨吸收活性的破骨细胞形成.
关键词： 金黄色葡萄球菌肽聚糖 破骨细胞 细胞分化 骨吸收 -
金黄色葡萄球菌肽聚糖促进破骨细胞分化的分子机制研究
目的 探讨金黄色葡萄球菌肽聚糖(Staphylococcal peptidoglycan,PGN-sa)促进破骨细胞分化的分子机制.方法 Western blot检测:取Raw264.7细胞,以PGN-sa或SC75741 (NF-κB激活的强效抑制剂)+PGN-sa分别作用0、1、2、3d,检测活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)蛋白表达;分别作用0、5、10、20、40、60 min,检测破骨细胞分化信号通路相关蛋白[细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB-α)、Akt及磷酸化蛋白p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt、p-NF-κB]表达.ELISA检测:取Raw264.7细胞分为4组,分别以100(A组)、200(B组)、400 ng/mL PGN-sa(C组)及PBS(D组)作用1、2、3d,检测TNF-α、IL-1α及IL-6的蛋白表达量.结果 Western blot检测:随培养时间延长,NFATc1蛋白表达量呈逐渐增加趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);但加入SC75741后,NFATc1蛋白表达在2、3d明显受到抑制,与未加入SC75741前比较差异有统计学意义(P＜0.001).PGN-sa刺激后5、10 min时IκB-α蛋白表达量明显降低,p-NF-κB蛋白表达量明显增高,均于20 min后恢复正常,5、10 min时蛋白表达量与其余时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.001),且5min时p-NF-κB蛋白表达量高于10 min时(P＜0.001).加入SC75741后,IκB-α及p-NF-κB的蛋白表达量无变化,各时间点间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).其他蛋白(ERK、p38、JNK、NF-κB、Akt及p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt)表达量在各时间点均无明显变化(P＞0.05).ELISA检测:各时间点A～D组TNF-α及IL-1α均未见表达.各组IL-6的表达随时间延长呈递增趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).培养1d时,各组间比较IL-6蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);2、3d时,A、B、C组IL-6蛋白表达显著高于D组,A、B、C组间呈递增趋势,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PGN-sa通过NF-κB信号通路促进破骨细胞的分化形成,IL-6在这一过程中可能起一定作用.
关键词： 金黄色葡萄球菌肽聚糖 破骨细胞分化 NF-κB 骨髓炎 分子机制
