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脐血CD34+细胞及其亚群的富集纯化与检测
CD34是一种表达在早期造血干细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面的一种特异性表面抗原,是早期HSC/HPC的一种特征性标志［1］。体内移植和体外培养的研究表明，多能干细胞存在于CD34+细胞群中［2，3］。CD34+细胞在正常造血组织中的含量甚微，只占骨髓MNC的0.5%～1.5%，在外周血中仅占0.001%～0.01%，脐血中占0.5%～3.5%。因此要想获得一定数量的CD34+ 细胞，必须对CD34+ 细胞进行纯化。免疫磁珠是包被有单克隆抗体的磁性微粒，它可特异性地与靶物质结合使之具有磁响应性，继而在外加磁场的作用下，结合有靶物质的磁珠被滞留，从而与其他成分分离，达到纯化富集的作用。此法可用于分离骨髓及血细胞，肿瘤细胞，核酸，细菌及其他微生物等［4］，其中以分离造血细胞应用为广泛。笔者探讨MACS分选富集脐血CD34+ 细胞，并以FCM评价其纯化效果。
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天津地区3000份脐血HLA-DR等位基因多态性分析
目的了解天津地区汉族人群HLA-DR位点基因多态性和HLA单倍型特点.方法采用反向聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)杂交的方法,对来源于天津地区汉族产妇的3000份脐血进行HLA-DR位点基因分型,对分型结果进行分析,并与欧洲白种人、西安汉族人群进行比较.结果天津地区HLA-DR等位基因以DRB1*15为常见,其后依次为DRB1*09,DRB1*07,DRB1*12和DRB1*04.主要单倍型依次为A*02-DRB1*09,A*02-DRB1*15,B*13-DRB1*07,A*02-DRB1*12,A*30-DRB1*07,B*46-DRB1*09.DRB1*12和DRB1*09在天津地区汉族人群中出现频率明显高于欧洲白种人,而DRB1*01与DRB1*03则明显低于欧洲白种人,与西安地区汉族人群比较,本资料除DRB1*04,DRB1*13低以外,其余均无显著差异.结论天津地区汉族人群HLA-DR位点等位基因多态性与北方汉族人群(如西安)分布相近.
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新鲜及冻存的人脐血移植于裸鼠的实验研究
目的探讨人新鲜脐血及冻存脐血移植于裸鼠的规律及差别。方法采用Balb/C nu+裸鼠致死量放射线照射后输入人新鲜或冻存脐血单个核细胞，观察小鼠存活率、存活时间，检测移植成活证据及干细胞在小鼠体内的迁移，定居情况。结果新鲜脐血组及冻存脐血组小鼠存活率及存活时间均显著高于对照组，前两组则无显著差异；PCR法及流式细胞术检测小鼠体内人特异性基因及细胞均证实了人冻存脐血已在小鼠骨髓内定居并植入成活，持续至少130d；但冻存脐血干细胞的迁移情况与新鲜脐血有所差异。结论脐血中富含造血干细胞,能使免疫缺陷小鼠获得造血和免疫重建;冻存可长期保存干细胞活性，但可能影响干细胞表面定居相关粘附分子，从而影响其迁移行为。
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异基因脐血移植后MN血型基因型的转变1例
脐血中含有丰富的造血干细胞和祖细胞,自1989年首例成功至今,脐血移植已越来越多地被临床用于治疗白血病等致死性的血液病.目前国内外有关脐血移植的研究不少,笔者观察了1例异基因脐血移植后MN血型基因型的转变,现将结果报告如下.
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脐血细胞成分及CD34CD38细胞含量分析
自20世纪80年代末起，采用脐血输注治疗再生障碍性贫血、恶性肿瘤等疾病取得疗效［1，2］。国内外学者近年来开始对脐血造血干/祖细胞等有效成分进行分析，由于研究方法、条件不同，所得结果差异较大。笔者采用全自动血细胞分析仪系统检测脐血细胞成分，并与相同条件下的成人外周血作比较;同时以流式细胞术为基础，建立了CD34CD38细胞的检测方法，分析脐血的细胞学组成和CD34CD38细胞的含量特点。
关键词： 脐血/胎血 CD34CD38细胞 -
4℃常规贮存下成人血和脐血的动态观察
为探讨4℃常规贮存条件下，红细胞的成熟、衰老情况，笔者对18份健康成人血，18份健康足月顺产婴儿胎盘脐带血中的网织红细胞进行动态观察，现将结果报告如下。1 材料与方法1．1 标本来源 18份成人血液，采自本血液中心无偿献血者，男女各9份，年龄18～25周岁，无菌采集于ACD保养液中。18份脐血，采自南京鼓楼医院妇产科，健康足月顺产婴儿胎盘脐静脉血，无菌采集于含25mlACD保养液中，选取总量(100±20)ml者作检样。以上两种标本均置4℃标准贮血冰箱内保存。
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脐血红细胞的渗透性特点
近年来,脐血作为造血干细胞来源已成为研究热点[1,2],脐血中含有高于成人的红细胞、血红蛋白、血小板,有更年青的红细胞[3],还含有多种造血因子[4],具有巨大的潜在临床应用价值,脐血输注辅助治疗已在国内使用[5,6].笔者在开发、研究脐血资源的过程中,为进一步了解脐血红细胞,尤其是年轻红细胞的特点做了一些实验,发现脐血红细胞的渗透脆性与正常成人红细胞的渗透脆性有明显的不同之处,现报告如下.
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不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较
目的探索一种高效快捷可适用于大型脐血库分离脐血造血细胞的理想方法.方法以改良的羟乙基淀粉(HES)分离法为主体,Ficoll密度梯度离心法、明胶法和自然离心沉降法进行对比,系统比较4种分离方法分离脐血总有核细胞(TNC)、单个核细胞(MNC)和CD34+造血细胞分离的得率效果.结果 4种分离方法在分离脐血TNC、MNC及CD34+造血细胞得率方面存在着显著性差异,其中以HES法和明胶法效果较好,两方法间无显著性差异,分别能使TNC、MNC及CD34+造血细胞的得率平均可达90.0%、89.0%、90.0%和82.7%、83.3%、84.5%.相比之下,HES无论在操作时间、操作过程、造血细胞的终体积和细菌污染率等方面都更具有明显优势.结论 HES法是一种高效、实用的脐血造血细胞分离方法,可适用于大型脐血库.
关键词： 脐血/胎血 造血细胞/CD34+ CD34+/分离 -
血浆置换用于ABO血型主侧不合脐血移植1例
在骨髓移植中,ABO血型不合已不是成功的主要障碍,但据报道,HLA相合的异基因骨髓移植后,ABO血型不合可发生免疫造血异常并发症者占10%～20%,其中1/5～1/15患者可发生纯红再生障碍性贫血(PRCA),其中供者血型为A型,受者为O型发生率高达90%[1].HLA相合的异基因脐血干细胞移植是目前治疗白血病的有效方法之一.1997年本院收治1例慢性粒细胞白血病患者,血型为O,与其胞妹脐血HLA相合,为预防PRCA发生,保证植入脐血干细胞有效成活,笔者对患者在移植前进行大剂量血浆置换,取得满意效果,现报告如下.1 病例摘要患者,男,16岁,身高178cm、体重35kg、血型O,ccDEe,N,患者因慢性粒细胞白血病于1999年7月来本院经羟基脲治疗达完全缓解后,在术前连续两次大剂量血浆置换,输注其胞妹(血型为A,CCDee,N)HLA相合脐血150ml,回输有核细胞数1.48×109/kg,CFU-GM 2.12×104/kg,CD34+细胞2.38×105/kg.输注顺利,未发生溶血反应.术后两月血型开始转变,210d复查已转变为A,CCDee,N.
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小鼠干细胞因子在人脐血细胞中的表达
干细胞因子(stem cell factor,SCF)是目前已知作用于早期造血细胞的因子之一,它突出的生物学活性是协同多种已知的造血因子调控各系造血.SCF在临床上用于某些血液系统疾病的治疗,促进肿瘤患者放、化疗后造血机能的恢复,还可以促进向早期造血细胞中基因转染,提高基因转染效率.SCF的氨基酸序列在种系间高度保守,人和小鼠的同源性达83%[1],在种系特异性方面,SCF在各动物间均有交叉性,小鼠的SCF可刺激人造血细胞的增殖、分化,而人的SCF只对人的造血细胞有作用,对小鼠的造血细胞则无效[2].在大肠杆菌中表达的重组可溶性SCF具有天然SCF的生物学活性,甚至仅其膜外活性区的前面164aa即具有生物学活性[3].笔者应用真核表达载体,以脂质体LipofectinTM介导将小鼠SCF基因转染人脐血细胞,经鉴定转染细胞的上清具有生物学活性.
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脐血干细胞移植的现状与我国建立健全脐血干细胞库的对策
造血干细胞移植(HSCT)已被广泛地应用于各种恶性血液病、实体肿瘤、遗传性疾病、重症联合免疫缺陷病以及重度放射病等顽疾的治疗中,并已公认是医治上述疾病有效的手段之一.
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脐血单个核细胞分离方法的比较及形态学改变
目的:探索一种简便、高效的脐血单个核细胞分离方法.方法:以Ficoll 密度梯度离心法与羟乙基淀粉(HES) 分离法进行对比,比较两种分离方法分离脐血所得的单个核细胞(MNC) 细胞数,并观察两组单个核细胞不同培养时间下形态学变化.结果:两种分离方法在分离脐血MNC方面存在着显著性差异,其中以HES法效果较好, 但HES法所得细胞培养后生长状态欠佳.结论:HES 法是一种高效的脐血单个核细胞分离方法,但该法所得细胞的生长状态欠佳,需进一步实验证实.
