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cAMP/Ca2+信号通路在红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经元细胞定向分化中的作用和机制
本研究旨在探讨cAMP/Ca2+信号通路在红景天苷诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元细胞定向分化中的作用机制.将骨髓间充质干细胞株D1细胞分为空白对照组和红景天苷诱导组,空白对照组细胞加入不含药物的等量D/F12完全培养液,诱导组细胞加入含有100 mg·L-1红景天苷的D/F12完全培养液分别作用24、48和72 h.运用RT2 Profiler PCR Array方法检测红景天苷诱导BMSCs不同时间后cAMP/Ca2+信号通路中差异表达的基因.实验表明,红景天苷分别诱导BMSCs 24、48和72 h后,与空白对照组比较,表达有差异的基因共38个,其中上调基因23个,下调基因15个,经过筛选上调较显著的基因有4个:DNA损伤诱导因子3(Ddit3)、热休克蛋白5 (Hspa5)、磷酸酶1调节亚单位15a (Ppplrl5a)、前列腺素内过氧化物合酶(Ptgs2);下调显著的基因有4个:胰高血糖素(Gcg)、白细胞介素2(Il2)、肿瘤坏死因子(Tnf)、生长激素抑制素(Sst).这些基因可能对红景天苷诱导BMSCs向神经元细胞的定向分化具有一定影响.
关键词： 红景天苷 骨髓间充质干细胞 神经元细胞 AMP/Ca2+信号通路 RNA表达谱 -
储存血小板差异性长链非编码RNA表达谱研究
目的 探讨机采血小板储存过程中差异性lncRNA表达谱变化及其差异表达的lncRNA在血小板储存损伤中潜在的生物学功能.方法 收集13(人)份O型健康男性机采血小板各50 mL,于(22±2)℃下震荡储存,应用lncRNA芯片技术检测储存2、5、8d机采血小板中lncRNA和mRNA表达谱变化;运用GO分析及KEGG分析预测差异表达的lncRNA功能分布,通过顺式调控分析预测lncRNA调控邻近蛋白编码基因表达的分子机制;采用实时PCR(RT-PCR)技术,验证8条lncRNA(MARCH2-2∶1、SLC2A2-1∶1、WBSCR16-3∶6、WEE 1-2∶1、ENTPD6-2∶1、NKD2-1∶1、FOXS1-2∶1、MAPK13-3∶1)和4条mRNA(BCL2L1、CAPN2、MAPK14、VAMP8)的表达.结果 芯片检测:血小板储存5与2d相比,有162种lncRNA的表达量发生明显变化,表达升高的4种、降低的158种;8与2d相比,有691种lncRNA表达量发生明显变化,表达升高的20种、降低的671种;8与5d相比,246种lncRNA表达量发生明显变化,升高的2种,降低的244种.GO和KEGG分析:差异表达的lncRNA可能参与的生理过程有血小板激活、血小板聚集、内吞、凋亡、肌动蛋白纤维聚集、肌动蛋白骨架的调节;顺式调控分析:lncRNA具有调控血小板相关mRNA表达的功能,USP39-1调控VAMP8的表达、TMEM86B-2调控GP6的表达、FOXS1-2调控BCL2L1的表达等.RT-PCR验证:与芯片检测结果一致,其中lncRNA MARCH2-2∶1、WEE 1-2∶1和NKD2-1∶1表达量升高,WBSCR16-3∶6、SLC2A2-1∶1、ENTPD6-2∶1、FOXS 1-2∶1和MAPK13-3∶1表达量下降,BCL2L1,CAPN2,MAPK14和VAMP8的表达量也下降.结论 血小板中含有大量的lncRNA,其表达量随着血小板储存时间延长而呈不同的变化趋势,总体来讲下调的lncRNA数量较多,且下调的幅度较大.部分变化的lncRNA可能与血小板生理功能密切相关,并且在血小板储存损伤中发挥作用.
