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结核病患者血清蛋白质/多肽谱的初步研究
目的 了解结核病患者血清蛋白质/多肽的表达,为新型结核病血清学诊断方法的研究提供基础依据.方法 (1)应用WCX蛋白质芯片和表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对99例肺结核患者和18例肺外结核患者进行了血清蛋白质/多肽谱检测,采用ClinProTools分析软件进行比较分析.(2)以"结核"、"双向电泳"、"表面增强激光解析-电离飞行时间质谱"、"血清学"、"蛋白质组学"及相应英文为检索词在万方医学数据库、PUBMED中检索中、外文献进行文献复习.结果 WCX蛋白质芯片从血清中捕获到99种蛋白质/多肽,其中m/z为5 753.76的蛋白质在肺结核与肺外结核两组间差异有显著性,在肺外结核患者血清中表达上调,其平均质谱峰面积在肺结核患者和肺外结核患者中分别为15.42±4.86、28.29±14.08.结论 结核病的发生可产生大致相同的血清蛋白质/多肽谱,在不同类型结核结核病患者血清中可以找到共同的血清学诊断标志物.
关键词： 结核 血清蛋白质 蛋白质组学 表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱 -
结核杆菌临床分离菌早期培养滤液蛋白质组的比较
目的:初步了解结核杆菌体外液培养条件下的早期蛋白质代谢和分泌活动状况.方法:将2株对抗结核一线药物敏感的结核杆菌临床分离菌接种Middlebrook 7H9液体培养基进行培养,并于培养第7天用0.22 μm滤纸过滤培养液制备早期培养滤液,应用与弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获滤液蛋白行表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测,描述性分析比较其蛋白质组.结果:在2株结核杆菌7d培养滤液中分别检测到相对分子质量为982 ～9 329与941～9 331、丰度为7～ 210与11～368(通过质谱峰面积计算相对强度值表示)的164与194种蛋白质；与Middlebrook 7H9液体培养基本身蛋白质组比较,在2株结核杆菌7d培养滤液中分别有153和183种蛋白质新产生(其中10种在2份滤液中均有存在)、92和90种蛋白质消失、10和13种蛋白质丰度变小.结论:在体外液体培养条件下,结核杆菌蛋白质代谢和分泌活动活跃,且不同菌株间有较大差异.
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应用弱阳离子交换蛋白质芯片捕获的健康成人血清蛋白质/多肽谱分析
目的:分析健康成年人血清蛋白质/多肽谱特点,为人类血清蛋白质组研究提供基础性资料.方法:应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)磁珠处理30例健康成年人血清,通过表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测血清蛋白质/多肽谱,描述性分析其种类、分子质量范围、丰度(用相对强度计量)、个体性差异等.结果:共检测到947种蛋白质/多肽,不同个体其种类数量在34～108不等,相对分子质量范围为1 059～ 10265,表达丰度在95 ～ 35 419之间;分别有570、154、71、36、32、26、18、16、14、5、2和3种相应血清蛋白质/多肽在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、14例个体血清中存在.结论:WCX2磁珠仅能捕获到数量较少的低丰度、低分子量人血清蛋白/多肽,在受检人群中这些蛋白/多肽呈现高度的个体差异性.
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不同结核病患者群血清蛋白质谱分析与比较
目的:比较分析菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者的血清蛋白质谱,从蛋白质组学层面了解不同结核病患者群血清蛋白质谱的特征,为结核病诊断标志物的筛选提供指导.方法:应用表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片系统,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)对54例菌阳肺结核、45例菌阴肺结核、18例肺外结核患者的血清蛋白质进行检测;应用ClinProTools分析软件依据各蛋白质的质谱峰面积计算相对强度表示该血清蛋白质的丰度,采用t检验(对Anderson-Darling检验P>0.05的正态分布者)或Wilcoxon检验(对Anderson-Darling检验P<0.05的非正态分布者)分析比较茵阳肺结核与茵阴肺结核、肺结核与肺外结核患者各血清蛋白质的平均丰度.结果:(1)在3种不同结核病患者人群中均捕获到102种相对分子质量在1 011.41～9 435.07的不同血清蛋白质,经Anderson-Dading检验,在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核患者人群中分别有31、23和29种血清蛋白质呈正态分布.(2)正态分布的血清蛋白质在不同结核病患者人群间其水平未见显著差异.(3)非正态分布的血清蛋白质:在菌阳肺结核与菌阴肺结核患者人群间其水平未见显著差异;在肺结核与肺外结核患者人群间发现1个差异血清蛋白质(P=0.025 1),其相对分子质量为5 753.76,在肺结核与肺外结核患者人群血清中的平均丰度分别为15.42±4.86和28.29±14.08.结论:不同结核病患者群的血清蛋白质谱具有同质性,为普遍适用性结核病血清学诊断标志物的筛选提供了科学依据.
