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白藜芦醇对碘普罗胺诱导人肾小管上皮HK-2细胞氧化应激及Klotho蛋白表达的影响
目的 探讨白藜芦醇对碘普罗胺诱导的人肾小管上皮HK-2细胞氧化应激及Klotho蛋白表达的影响.方法 应用不同剂量(137.5、275.0和550.0 mgI/mg)的碘普罗胺处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立离体的对比剂肾病模型,以MTT比色法检测细胞存活率、试剂盒法检测乳酸脱氢酶酶(LDH)活力以及流式细胞术检测细胞凋亡百分率.加入不同剂量(1、10和100 μmol/L)的白藜芦醇或N-乙酰半胱氨(NAC)处理,检测碘普罗胺诱导的HK-2细胞存活率、LDH和细胞凋亡百分率的变化,同时使用CM-H2DCFDA荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)荧光强度,采用Western bolt法检测各组细胞的Klotho蛋白表达情况.结果 碘普罗胺处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h后,HK-2细胞的存活率呈剂量依赖性下降, LDH和凋亡率均呈剂量依赖性地升高;加入不同浓度白藜芦醇处理后,白藜芦醇能呈剂量依赖性地抑制碘普罗胺所致的细胞存活率下降、LDH和凋亡率的升高,效果与NAC类似.此外,与对照组比较,碘普罗胺组的ROS荧光染色增加.加入白藜芦醇或NAC后,均能抑制由碘普罗胺所致的ROS荧光染色增加.在Klotho蛋白表达方面,与对照组比较,碘普罗胺组的Klotho蛋白表达下调,加入白藜芦醇后,能有效抑制由碘普罗胺所致的Klotho蛋白表达下调,而加入NAC后,并不能有效抑制由碘普罗胺所致的Klotho蛋白表达下调,其Klotho蛋白表达与单纯碘普罗胺组相当.结论 白藜芦醇具有抑制碘普罗胺所致的HK-2细胞毒性作用,效果与NAC相近,其机制可能与白藜芦醇上调Klotho蛋白从而降低碘普罗胺所致的HK-2细胞氧化应激水平有关.
