首页 > 文献资料
-
MAPKs和Nrf2/ARE通路调控卵巢颗粒细胞氧化应激的机制研究
目的 运用过氧化氢(H2O2)制作人卵巢颗粒细胞(COV434)氧化应激模型,通过检测氧化应激MAPKs和抗氧化应激Nrf2/ARE通路的变化,探讨COV434氧化应激的机制.方法 研究不同H2O2浓度(0.5、1、1.5 mmol/L)和不同作用时间(1、2、4、6及12 h)梯度下,MAPKs家族中ERK、P38及JNK蛋白及其磷酸化的表达水平,Nrf2/ARE通路中Nrf2、keap1和P62蛋白表达水平.结果 在H2O21.5 mmol/L浓度作用下,COV434细胞内p-ERK、p-P38、p-JNK在1h表达强;在不同浓度H2O2作用4h后,p-ERK不随浓度的变化而变化,然而p-P38、p-JNK随浓度的增加表达增强;Nrf2蛋白表达随着H2O2作用时间的延长和浓度的增加逐渐增强;Keap1在H2O21.5 mmol/L浓度作用下,随着时间延长蛋白表达轻度下降,而P62的蛋白表达轻度上升;在不同浓度H2O2作用4h下Keap1变化不明显,而P62表达稍微增强.结论 MAPKs 3个亚族均参与了H2O2诱导COV434氧化应激过程,氧化应激可以诱导细胞内Nrf2的蛋白表达,提示Nrf2/ARE通路在COV434自我抗氧化中发挥作用.
关键词： 人卵巢颗粒细胞COV434 氧化应激 MAPKs Nrf2/ARE -
过氧化氢诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的建立
目的 探讨构建过氧化氢(H2O2)诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的方法.方法 不同浓度H2O2处理人卵巢颗粒细胞COV434,采用Western blot检测Caspase-3表达,流式细胞仪和DAPI/TUNEL双染色法检测细胞凋亡情况,H2DCF-DA检测细胞内活性氧族(ROS)水平,通过量效关系和时效关系来确定H2O2的佳作用条件.结果 1 ～ 1.5 mmol/L浓度H2 O2处理COV434细胞2～4h后Caspase-3表达量升高明显.随着H2 O2浓度增加及作用时间的延长细胞凋亡率不断升高.细胞内ROS水平随着H2 O2浓度的增加而增加.1.5mmol/L浓度H2 O2处理1h后细胞内ROS水平上升明显.结论 H2 O2诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的适宜浓度为1 ～ 1.5 mmol/L,采用细胞凋亡情况评价作用时间是2～4h,采用ROS评价作用时间为1h.
关键词： 过氧化氢 人卵巢颗粒细胞COV434 氧化应激模型
