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mTLR-2文献资料
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小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备
目的 克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2 N末端的多克隆抗体.方法 采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接ELISA检测抗体特异性及效价.结果 成功构建了融合表达载体pET-N,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pGEX-N表达的融合蛋白反应,并可结合表达TLR-2的RAW264.7及转染mTLR-2全长基因的CHO细胞.结论 获得了mTLR-2 N末端重组融合蛋白及其可与天然mTLR-2结合的多克隆抗体.
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mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
目的:克隆mTLR-2基因,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白.方法:采用RT-PCR从鼠肝脏中扩增mTLR-2全基因,并将其克隆到T载体中,测序验证.将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中,构建重组质粒,并转化毕赤酵母.重组酵母以PCR、RT-PCR验证,表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果:克隆了mTLR-2全基因(AY179346),与已发表的mTLR-2基因的同源性为99.84%.构建了重组表达质粒pPICZ-mTLR-2.SDS-PAGE和Western blot分析显示,在相对分子质量(Mr)为约97 000处出现1条特异性蛋白带,且能与兔抗mTLR-2抗体发生反应.结论:克隆了mTLR-2全基因,并在毕赤酵母中获得表达.
