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限制性显示PCR文献资料
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应用限制性显示技术筛选K562细胞脱核前后差异表达基因
目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(CytochalasinB,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制.方法用CB(终浓度为10μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选CB处理前后差异表达的基因.对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在GenBank检索进行序列同源性分析.结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(AQP1)基因经反转录PCR验证在CB诱导脱核的K562细胞中表达上调.结论AQP1基因在CB诱导K562细胞脱核过程中特异性高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关.
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两种限制性标记方法提高基因芯片杂交结果的信噪比
目的研究采用荧光标记的通用引物扩增或在扩增中掺入荧光标记dNTP两种限制性荧光标记方法标记探针对提高表达谱基因芯片杂交结果信噪比的作用.方法酵母mRNA经常规逆转录标记方法及两种限制性标记方法进行标记,探针纯化后与酵母表达谱基因芯片进行杂交,在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测.结果两种限制性标记方法与直接逆转录标记相比杂交结果背景低,信噪比及灵敏度高,其中以荧光标记的通用引物扩增效果佳.结论采用限制性标记方法后杂交结果信噪比提高,有利于基因芯片技术的应用.
