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多重PCR检测毒力型艰难梭菌的方法学研究及应用
目的 建立多重PCR方法检测毒力型艰难梭菌.方法 设计艰难梭菌种特异tpi引物和毒力基因tcdA、tcdB特异性引物,建立多重PCR方法.利用已知菌株,验证方法的特异性和低检出限.与厌氧培养法、ELISA法比较其检测临床菌株和其毒素分泌的准确性.结果 多重PCR方法检测艰难梭菌的低检出浓度为0.7 pg/μl,特异性为100％.53株厌氧培养法鉴定的艰难梭菌临床分离株,多重PCR方法检测tpi基因均为阳性,其中tcdA +/tcdB+为39株,tcdA-/tcdB-为14株.ELISA法检测毒素A/B显示23株为阳性、30株为阴性.23株ELISA法毒素A/B阳性的艰难梭菌多重PCR方法检测结果均为tcdA+ /tcdB+.结论 多重PCR方法可用于检测毒力型艰难梭菌具有较高的临床应用价值.
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多重PCR方法检测沙门氏菌血清型适用性探讨
目的 探讨在食源性疾病病例监测中,多重PCR方法用于沙门氏菌的血清型分型的适用性.方法 利用多重PCR方法对113株分离自食源性疾病病例的沙门氏菌进行血清分型,得到菌株可能血清型.同时,菌株血清型经Luminex xMAP((R))沙门氏菌血清分型法及传统的血清玻片凝集方法终确定.比较可能血清型与菌株确定血清型间的符合程度,探讨多重PCR方法用于沙门氏菌血清分型的适用性.结果 在113株菌株中共检出23个沙门血清型.多重PCR方法可准确推测其中11个血清型,涵盖了113株中的94株(83.2％).结论 多重PCR方法为食源性疾病监测中的沙门氏菌血清分型提供了简便快速、价格低廉的辅助方式,利于在基层公共卫生实验室推广.
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多重PCR方法同时鉴别人参、西洋参、三七
目的:建立一种能同时鉴别人参属人参、西洋参、三七3种药材的多重聚合酶链反应(PCR)方法.方法:通过分析人参、西洋参、三七psbA-trnH基因序列的差异设计了特异性引物对1,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术筛选获得的特异性片段的基因序列,设计了特异性引物对2;优化了多重PCR鉴别体系并验证其耐受性和实用性.结果:构建的多重PCR鉴别体系能够成功地鉴别人参、西洋参、三七,人参样本可扩增出片段大小约为150 bp的特异性条带,西洋参样本可扩增片段大小出约为150 bp和400bp 2条特异性片段,三七样本可扩增出片段大小约为400 bp的特异性条带.结论:本多重PCR鉴别体系特异性好,可准确、可靠地鉴别人参、西洋参、三七.
