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肿瘤RNA转染DCs与同源CIKs共培养调控Akt/NF-κB细胞生存信号通道的实验研究
目的研究肿瘤RNA转染树突状细胞（DCs）与同源细胞因子诱导的杀伤细胞（CIKs）共培养对前列腺癌细胞PC3内Akt/NF-κB生存信号通道的影响,探讨这种免疫治疗引起肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法体外培养CIKs、DC-CIKs和RNA转染的共培养的DC-CIKs作为效应细胞,以传代培养的PC3细胞作为靶细胞,分别加到TRANSWELL 6孔细胞培养板上、下室。收集靶细胞,分别提取细胞可溶性总蛋白和核蛋白,利用Western Blotting检测Akt,phospho-Akt,phospho-IKKα/β以及NF-κBp65的表达量,以未干预的PC3细胞总蛋白和核蛋白作为阴性对照,以PI3K抑制剂LY294002作为实验的阳性对照。以β-actin作为内参照,利用Quantity One软件定量分析。结果以未干预的PC3细胞作为阴性对照,CIKs、DC-CIKs和RNA-DC-CIKs各免疫效应细胞处理组均显著抑制细胞浆中磷酸化Akt和磷酸化IKKα/β的表达。转录因子NF-κBp65的核定位减少,表达量降低。但胞浆中总Akt表达在实验组和对照组之间无显著性差异。各实验组间表达量比较,结果显示在RNA-DC-CIKs组phospho-Akt和phospho-IKKα/β和转录因子NF-κBp65表达量比CIK组更低,但无显著性差异。结论肿瘤RNA负载DC-CIKs、DC-CIKs和CIKs均能显著抑制PC3细胞内Akt的活化,降低活化的IKKα/β的表达,导致转录因子NF-κBp65核内定位和表达降低,从而抑制细胞生存信号通道,诱导肿瘤细胞凋亡。
关键词： 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 前列腺癌 Akt/NF-κB 信号通道 -
楤木皂苷通过降低 Akt／NF-κB 通路抑制HeLa 细胞的增殖并促进其凋亡
目的：探讨！木皂苷对人宫颈癌 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响。方法以体外培养的人宫颈癌 HeLa 细胞为研究对象，实验分为阴性对照组和！木皂苷组（50、100、200μg／mL）共4组，分别给予 RPMI-1640培养液和！木皂苷（50、100、200μg／mL）处理。24、48和72 h 后，分别收集各组细胞，采用 MTT 法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western blot 技术测定细胞内蛋白（pAkt1、pIкBα、NF-κB p65、Bcl-2和 Caspase-3）表达水平。结果！木皂苷呈时间-剂量依赖性地抑制 HeLa 细胞的增殖，并增加其凋亡水平。另外，！木皂苷显著降低 Akt1和 IкBα的磷酸化水平，减少 NF-κB（亚基 p65）和 Bcl-2的蛋白表达，相反却显著增加 Caspase-3的含量。结论！木皂苷通过降低 Akt／NF-κB 信号通路的活性抑制宫颈癌 HeLa 细胞的增殖并促进其凋亡。
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Akt/NF-κB信号通路参与白藜芦醇对乳腺癌细胞的调控
目的 探讨并揭示白藜芦醇(Resveratrol)通过调控Akt/NF-κB信号通路对乳腺癌细胞增殖的分子机制,并对其中的干预机制进行研究,从而为临床治疗乳腺癌提供新的理论依据.方法 通过电泳测得经白藜芦醇干预的MDA-MB-231细胞的Akt/NF-κB信号通路蛋白和对照组电泳进行对比分析.结果 白藜芦醇对Akt及NF-kB的影响:研究发现,当给予细胞白藜芦醇干预后,与对照组相比,Akt及NF-kB的蛋白水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Akt在细胞存活和凋亡中起到重要作用.PI3K-Akt在细胞周期进展、分化、转录、凋亡等过程中发挥重要的作用.
