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9型重组腺相关病毒转染microRNA-21前体在大鼠心肌的转染效率及安全性
目的 研究含荧光标记ZsGreen的9型重组腺相关病毒(rAAV9)转染目的基因microRNA-21前体(pre-miR-21)至大鼠心肌的转染效率、表达时间及安全性.方法 用冠脉注射方法转染PBS及rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21 1.0×1010 vg/只、1.0×1011 vg/只、1.0 x 1012vg/只至SD大鼠心肌,倒置荧光显微镜观察心肌组织荧光表达并计算转染效率,Realtime PCR方法测定miR-21表达,超声心动图观察大鼠心功能.结果 冠脉注射后7 d PBS组未见绿色荧光,余各组大鼠心肌均可观察到少量绿色荧光表达,第14天达高峰,之后呈下降趋势.14d高病毒量组较其他中、低病毒量组转染效率明显高[(73.7±8.4)％ vs (39.6±4.8)％,(P＜0.001)]；[(73.7±8.4)％ vs (24.1±4.2)％,(P＜0.001)].14d miR-21表达在低、中、高病毒量组较PBS组分别增加1.51倍、2.89倍及4.43倍.rAAV9转染后对大鼠心功能无影响(P＞0.05).结论 rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21可以有效、持久、安全地在大鼠心肌表达.
关键词： 腺相关病毒 9型重组腺相关病毒 MicroRNA-21 转染效率 -
9型重组腺相关病毒转染体外培养大鼠心肌细胞的影响
目的:研究含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对细胞生长的影响.方法:rAAV9-EGFP按转染复数(MOI)1×10~5、1×10~6、1×10~7转染H9C2细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察H9C2细胞中EGFP阳性表达情况,采用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染效率.观察转染后细胞生长形态,并用Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖影响.结果:转染后第1天,MOI=1×10~6、1×10~7组中EGFP开始表达;第2天,MOI=1×10~5组开始表达,各组EGFP表达强度随MOI值的增高而增强,同时EGFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强;转染后第4天达到高峰,此时流式细胞术检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染率分别为MOI=1×10~5组:(14.1±0.2)%、MOI=1×10~6组:(35.1±4.8)%、MOI=1×10~7组:(56.8±0.1)%.rAAV9-EGFP转染H9C2细胞后,细胞生长及形态正常,Alamar Blue法进一步检测表明转染组对H9C2细胞增殖无影响.结论:rAAV9-EGFP能够有效地转染H9C2细胞,且rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖无明显抑制.
