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SCN3A基因突变型表达载体的构建及HEK 293细胞中的表达
目的 体外构建含有SCN3A基因mRNA片段的质粒pCMV6-XL4-SCN3A的突变体N302S(c.905A＞G),为进一步的功能研究奠定实验基础.方法 设计带突变位点的引物,以野生型质粒为模板进行定点诱变,构建突变质粒.质粒经扩增纯化后瞬时转染到HEK293细胞中,24 h后用RT-PCR方法验证目的基因的表达.结果 重组质粒经酶切鉴定及测序证实突变成功.突变质粒转入HEK293细胞系24 h后,RT-PCR可以检测到目的基因的表达.结论 本实验成功地构建了SCN3A 基因突变型真核表达载体pCMV6-XL4-SCN3A-N302S,并在基因水平上验证了能在HEK293 细胞中表达.
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丙戊酸钠对SCN3A基因表达的抑制作用
目的：研究丙戊酸钠在Nav1．3通道基因表达中的作用，为癫痫的临床治疗提供新的依据。方法：通过用丙戊酸钠对 N1E-115细胞进行处理，检测丙戊酸钠处理后 N1E-115细胞的 SCN3A mRNA 水平；把SCN3A基因启动子构建成表达载体，转染到 N1E-115细胞中，再用丙戊酸钠对转染质粒的细胞进行处理，检测SCN3A mRNA的水平及萤火虫荧光素酶的表达水平。结果：丙戊酸钠对SCN3A具有明显的抑制作用，丙戊酸钠能抑制SCN3A的表达，降低SCN3A蛋白的表达水平。结论：丙戊酸钠通过降低 SCN3A 的表达达到抑制癫痫发作的作用，开启了对丙戊酸钠治疗癫痫机制的新认识。
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62例热性惊厥患者的SCN3A基因突变筛查分析
目的 对热性惊厥患者进行SCN3A基因突变筛查,并分析突变点的致病性.方法 收集62例热性惊厥患者的病史资料和血液样本;应用PCR扩增和一代测序方法筛查SCN3A基因突变;采用生物软件分析突变点的遗传特征.结果 共发现2例错义突变(c.905A>G,c.5179G>A)和1例多态性位点(c.1441C> T).错义突变位于2例不同的患者中,分别诊断为全面性癫痫伴热性惊厥附加征和部分性癫痫伴热性惊厥附加征,其氨基酸位点均高度保守,在ExAC和千人基因组计划中及在100例健康对照中没有发现相应的位点改变.结论 SCN3A基因在热性惊厥患者中突变率很低(3.23%),可能不是其主要致病基因.
