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MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移
目的:探讨 microRNA —483—3P(miR—483—3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证 miR—483—3P 的靶基因及其对靶基因的影响。方法miRNA 微阵列芯片结果发现 miR—483—3P 在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达 miRNA 的首位。利用阳离子脂质体 LipofectamineTM2000将化学合成的 miR—483—3P inhibitor、miR—483—3P inhibitor 的阴性对照序列分别瞬时转染入人神经母细胞瘤 SH—SY —5Y 细胞株中,RT—qPCR 技术检测各组中 miR—483—3P 的表达水平,CCK—8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell 小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测 miR—483—3P 的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、West-ern blot 实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR —483—3P 在神经母细胞瘤中高表达(P <0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染 miR —483—3P inhibitor 后,miR —483—3P 表达显著下调(P <0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P <0.05)。生物信息学软件预测出 RIOK3是 miR—483—3P 的靶基因之一,当细胞转染了 miR—483—3P inhibitor 后荧光酶活性升高(P <0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了 miR —483—3P inhibitor 后在蛋白质水平 RIOK3表达升高(P <0.01)。结论RIOK3是 miR—483—3P 的靶基因之一,miR—483—3P 能下调 RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。
关键词: 神经母细胞瘤 miR-483 -3P 细胞增殖 侵袭 靶基因