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人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞过程中CaN-NFATc信号通路表达的变化
目的 探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFATc)信号通路在5-氮杂胞苷(5-aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用.方法 收集足月顺产健康产妇的脐带,于无菌条件下剪碎后体外分离、培养hUCM-SCs,采用10μmol/L或20μmol/L 5-aza对P3代hUCMSCs诱导24 h后继续培养4周.采用RT-PCR和Western Blot检测诱导前、后Calcineurin A、GATA4和NFATc2表达.结果 与诱导前和对照组比较,10μmol/L和20μmol/L浓度诱导4周hUCMSCs的CalcineurinA、GATA4和NFATc2表达均明显上调(P<0.05或P<0.01).10μmol/L浓度的5-aza诱导效果效果明显优于20μmol/L(P<0.05或P<0.01).对照组4周后CalcineurinA、GATA4和NFATc2表达水平较诱导前无明显变化(P>0.05).结论 CaN-NFATc信号通路参与hUCMSCs心肌细胞分化的调控,10μmol/L的浓度是5-aza诱导hUCMSCs心肌细胞分化的佳浓度.
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miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化
目的 探究miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化过程中的作用及其作用机制.方法 通过转染hUCMSCs过表达或抑制miR-92b-3p,qRT-PCR检测各组成骨相关基因OCN、RUNX2、OSTERIX mRNA表达以明确miR-92b-3p对hUCMSCs成骨分化的体外调控作用,用茜素红染色比较各处理组的骨化能力.通过生物信息学分析miR-92b-3p可能的靶基因,并通过双荧光素酶基因报告系统以及Western blot验证.结果 miR-92b-3p在hUCMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P＜0.05);过表达miR-92b-3p能促进hUCMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力(P＜0.05);而抑制miR-92b-3p则能降低hUCMSCs体外成骨分化(P＜0.05).过表达miR-92b-3p能显著降低DKK1的表达量(P＜0.05),抑制则能明显提高DKK1的表达(P＜0.05).结论 miR-92b-3p可通过抑制DKK1表达,促进hUCMSCs成骨分化.
