首页 > 文献资料
-
Desmuslin基因过表达对曲张静脉源性平滑肌细胞增殖及迁移功能的影响
目的 通过Desmuslin (DMN)重组逆转录病毒表达载体感染曲张大隐静脉源性平滑肌细胞(SMCs),观察上调DMN的表达后对SMCs功能的影响,探讨DMN与下肢静脉曲张发生发展的关系.方法 贴块法行曲张静脉源性SMCs原代培养,免疫荧光细胞化学法鉴定SMCs的纯度;分别运用已制备好平均滴度为(2.80±1.46)×106 cfu/ml的pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN重组逆转录病毒与pRetroQ-AcGFP1-C1空载逆转录病毒感染SMCs;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测转染效率;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测比较SMCs的增殖活性;Transwell技术检测SMCs的迁移活性.结果 免疫荧光细胞化学法显示特异性的平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)染色阳性的细胞数占总细胞数的99％以上;DMN过表达组的DMN mRNA水平为空载组的(8.3±1.1)×104倍(P＜0.01),DMN蛋白表达为空载组的(4.5±1.2)倍(P＜0.01);DMN过表达组SMCs增殖活性为空载组的(48.2±4.5)％(P＜0.01);DMN过表达组细胞的迁移活性为空载组的(44.3±4.7)％(P＜0.01).结论 在曲张静脉源性SMCs中上调DMN的表达后显著抑制SMCs的增殖及迁移活性,DMN蛋白可能在下肢静脉曲张的发生发展中起着重要作用.
-
Desmuslin基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立
目的 构建Desmuslin (DMN)基因的逆转录病毒表达载体,并建立其包装细胞株.方法 聚合酶链式反应(PCR)扩增DMN基因的全长编码框(约3700 bp),PCR产物(PCR-DMN)亚克隆至逆转录病毒载体pRetroQ-AcGFP1-C1,构建DMN基因的逆转录病毒表达载体pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN,酶切及测序鉴定后,把重组质粒通过转染导入包装细胞株PT67,嘌呤霉素筛选后获得抗性克隆,293细胞进行病毒颗粒滴度测定.结果 pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN克隆的酶切鉴定和测序鉴定结果表明DMN基因的全长编码框被准确克隆至载体pRetroQ-AcGFP1-C1,其序列与理论序列完全一致;获取了稳定产生DMN逆转录病毒的PT67细胞克隆株,其产生的病毒原液平均病毒滴度为(2.80±1.46)×106 cfu/ml.结论 成功构建了Desmuslin基因逆转录病毒表达载体并建立了其包装细胞株.
-
PDVI患者曲张大隐静脉组织中DMN水平的表达
[目的]探讨 Desmuslin(DMN) 及其基因表达水平在原发性下肢深静脉瓣膜功能不全(primary deep vein valve insufficiency, PDVI)引起的大隐静脉曲张组织中的变化.[方法]分别用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和 Western blotting 检测 PDVI病人曲张大隐静脉以及正常人大隐静脉组织中 DMN 基因和 DMN蛋白的表达水平,用图像分析软件分析电泳照片,比较两组标本条带积分光密度的差异.[结果]RT-PCR中,病例组扩增的条带积分光密度为 20 225.3± 1 573.6,对照组为 117 327.9± 9 183.5(P< 0.01);Western blotting中,病例组条带积分光密度为 16 786.9± 3 169.3,对照组为 93 739.3± 8 614.8(P< 0.01).[结论]DMN蛋白和 desmuslin基因表达的下调可能与 PDVI引起的大隐静脉曲张有关.
