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POAG相关基因MYOC cDNA的克隆及MYOC/GFP融合蛋白在真核细胞的表达与定位
目的克隆原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)相关基因MYOC cDNA,研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位.方法用RT-PCR法,从人眼组织(角膜缘、睫状体)中扩增MYOC cDNA,克隆入载体pGEM-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N3中,构建pEGFP-N3-MYOC重组表达质粒,然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,后通过脂质体包埋转染法,用pEGFP-N3-MYOC和pEGFP-N3质粒转染Hela和COS-7细胞,用荧光显微镜观察它们在Hela和COS-7细胞内的表达和定位.结果经酶切和DNA序列测定,证实重组质粒构建正确,荧光显微镜观察MYOC/GFP融合蛋白能在Hela和COS-7细胞中表达并且定位在细胞质中,而GFP分布在整个细胞内.结论成功克隆POAG相关基因MYOC cDNA,并且MYOC/GFP融合蛋白只表达在Hela和COS-7细胞质中,这为进一步研究POAG发病机制奠定了基础.
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原发性开角型青光眼家系中一个新的MYOC基因突变
目的 对MYOC(Mycolin)基因突变与一个POAG(primary open-anggle glaucorna)家系的相关性进行研究,以便进一步揭示MYOC基因突变在中国人群POAG发病中的作用.方法 用PCK-RFLP和基因测序的方法对一个来自中国西部地区POAG家系和200例正常人进行MYOC基因突变(包括G34C,C1009G,A1036G,G1099A,A1139C,T1430A和C1441A等)筛查,同时对检测到的突变结果进行生物信息学分析.结果 该家系共67人尚健在56人,其中11人已确诊为POAG,3例因为眼压(IOP)22 mmHg而被定义为可疑者,其余42例表型正常.检出1个新的杂合子突变C38T,该突变存在于4例已确诊的POAG病人和1例可疑者中,突变率为8.8％,200例对照者中未检出.未检出其他突变.结论 通过生物信息学分析,虽然C38T突变并未导致蛋白质的结构和性质发生明显变化,但仍不能排除它是该家系的致病性突变的可能.基因检查可能是家族性POAG早期诊断的一种有效的方法.
