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内质网应激反应介导反复高热惊厥大鼠海马神经元的凋亡
目的 观察反复高热惊厥(FS)大鼠海马神经元凋亡,及内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78和内质网促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达的改变,探讨内质网应激反应在热性惊厥后脑损伤中的作用.方法 SD大鼠80只,雌雄各半,随机分为对照组和反复FS组,每组40只.采用反复热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次.应用原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测凋亡细胞,免疫组织化学、免疫蛋白印记(Western blot)和荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测反复FS后3、6、12、24,48 h和对照组大鼠海马内GRP78及Caspase-12 mRNA和蛋白的表达.结果 反复FS后随着时间的延长,反复FS组大鼠TUNEL阳性神经元数目明显增加,于惊厥后24 h达高峰.Hoechst染色可见其凋亡细胞的核浓缩和核碎裂.Western blot显示反复FS组大鼠3、6、12 h海马内GRP78蛋白的表达较对照组明显增高,表达高峰在FS后6 h.GRP78 mRNA的表达时相改变和高峰出现时间与蛋白表达类似.免疫组织化学显示其GRF78蛋白广泛分布于海马内各个区,与对照组分布相同.FS后12、24和48 hCaspase-12活性片段的表达较对照组明显增多,24 h达峰值.12,24、48 h Caspase-12 mRNA的表达与对照组的比较有显著性差异,24 h达高峰.免疫荧光双标记显示Caspase-12活性片段阳性细胞大多为神经元,并与TUNEL染色共定位,表现为核浓缩和核碎裂.结论 Caspase-12介导的内质网应激凋亡途径参与了反复FS导致的神经元凋亡过程.
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纳洛酮对反复高热惊厥后神经细胞凋亡的影响分析
目的:研究分析在不同时间应用药物纳洛酮对反复高热惊厥后神经细胞凋亡的影响。方法采用热水浴惊厥的模型对80只产后15天SD的大鼠进行热惊厥诱导,此批大鼠共发生惊厥7次,将80只大鼠按照随机对照原则分为对照组与观察组各40只。观察组大鼠分别于每次惊厥发生后的5、30、60min以及2h给予1mg/kg的纳洛酮腹腔注射,而对对照组大鼠惊厥时相同时间点进行等量生理盐水腹腔注射。在第7次惊厥后的一日内将实验大鼠处死,选择精密电镜观察神经凋亡细胞形态学的超微改变,并应用原位处末端脱氧核苷酸的生物素标记法(TUNEL)分别对大鼠大脑皮层的神经元及海马结构的凋亡情况进行测定。结果观察组在实验大鼠惊厥发生后的5、30、60min应用纳洛酮较对照组大鼠可显著减少其神经细胞凋亡的数目,差异明显(P<0.05),具有统计学意义;而在惊厥后2h用药对神经细胞凋亡的影响较对照组差异不明显(P>0.05),不具统计学意义。就TUNEL阳性细胞数对比,不同时间给药效果存在差异,提示给药时间越早其神经细胞凋亡发生越少。结论在高热惊厥后早期应用纳洛酮可明显减少脑损伤造成的神经细胞凋亡,具有保护脑神经细胞的特点。