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基于2-DE和蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶的表达及其诊断应用
目的 扩增并表达日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶(SjOAT),评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法 构建pET28a/SjOAT质粒,转化至E.coli BL21,IPTG诱导表达;应用Ni2+亲和层析法纯化OAT;SDS-PAGE和West-ern blot分析、鉴定表达产物;应用ELISA法检测待检患者血清,比较SjOAT与日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对血吸虫和其它寄生虫感染的检测结果.结果 成功克隆表达了SjOAT,Western blot检测结果 表明rSjOAT能被血吸虫病患者血清识别;以rSjOAT-ELISA和SjSEA-ELISA分别检测急/慢性血吸虫病患者和其它寄生虫感染者血清的结果 经校正χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05);对于正常对照者血清和疫区粪检阴性者血清,两种检测方法 的特异性比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 rSjOAT在体外获得表达,用于诊断人血吸虫病具有高度敏感性和特异性.
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鸟氨酸氨基甲酰转移酶在肾脏疾病中的诊断价值
目的:探讨鸟氨酸氨基甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OCT)在肾脏疾病的诊断价值.方法:分别利用酶联免疫吸附试验和速率法测定健康对照组130例和各类肾脏疾病114例的血清、尿OCT和尿肌酐(UCr)值.结果:健康对照组、肾肿瘤、肾病综合征、上尿路感染、急性肾小球肾炎组的血清OCT值分别为:0.12、0.68、2.35、6.45、144.22 IU/L,它们的尿OCT/尿Cr比值分别为:21、133、118、143、371,肾脏疾病组的血清OCT及尿OCT/尿Cr分别显著高于健康对照组(P＜0.05).血清OCT与尿OCT/尿Cr诊断急性肾小球肾炎的敏感度分别为83%、87%,特异性分别为73%、75%.结论:血清OCT与尿OCT/尿Cr是诊断肾脏疾病的特异性指标,对肾脏疾病有较高诊断价值.
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OAT在非小细胞肺癌中的表达及生物信息学分析
背景与目的 已有的研究表明,鸟氨酸氨基转移酶( ornithine aminotransferase,OAT)可能参与多种恶性肿瘤的发生和发展,本研究旨在检测非小细胞肺癌( non-small cell lung cancer,NSCLC) 中OAT mRNA和蛋白质的表达,并对其进行生物信息学分析.方法 通过RT-PCR的方法比较A549和16HBE细胞间OAT mRNA水平的差异;采用免疫组织化学SP法检测55例肺癌组织和17例癌旁肺组织中OAT蛋白表达;利用生物信息学的方法对OAT蛋白的生物信息学特征和相互作用蛋白进行分析,并对筛选出来的相互作用蛋白进行GO注释和信号通路分析.结果 ①A549中OAT mRNA相对含量较16HBE中低,两者差异约2.85倍.②NSCLC中OAT蛋白的表达明显高于癌旁肺组织(P＜0.05);OAT蛋白在鳞癌和腺癌间的表达差异有统计学意义,而与患者性别、年龄、有无淋巴结转移、肿瘤直径及TNM分期无关.③生物信息学分析提示OAT蛋白定位于线粒体、为高度保守的亲水性蛋白,具有Aminotran-3结构域,可能存在多个丝/苏氨酸磷酸化位点,在信号转导、转录和分子转运等方面发挥一定的作用;在筛选出来的54种可能和OAT存在相互作用的蛋白质中,TNF和TRAF6这两种蛋白参与了NF-κB信号通路.结论 OAT可能在NSCLC的发生和发展中发挥重要作用,有望成为肺癌的早期诊断标志物和治疗的新靶点.
